PRCTICA No. 2 ANLISIS MICROBIOLGICO DE LECHE FRESCA OBJETIVO.

El alumno aplicar los conocimientos bsicos adquiridos para la determinacin de microorganismos presentes en una muestra de leche bronca y una de leche pasteurizada. INTRODUCCIN. La leche constituye un excelente medio de cultivo para el desarrollo de microorganismos. Estos, pueden proliferar rpidamente en ella y provocar transformaciones deseables e indeseables. La accin de bacterias lcticas se aprovecha en la obtencin de mantequilla, crema cida, leches fermentadas y quesos. En una leche fresca el nmero de microorganismos aumenta por: contacto con el aire, utensilios de la ordea, higiene de las manos del ordeador. Las bacterias ms frecuentes de la leche y sus productos derivados son: a) Bacterias lcticas b) Coliforrmes c) Proteolticas d) Propinicas e) Butricas f) Mesoflicos g) Patgenas La tecnologa moderna disea gran nmero de equipos y procesos, produce detergentes, germicidas, etc; que al utilizarlos correctamente aseguran la obtencin de la leche y sus derivados en condiciones higinicas que garantizan la salud de quien la consuma. Los elementos imprescindibles para lograr este objetivo son:

1.- Personal responsable y capacitado. 2.- Sistema de inspeccin y control de laboratorio eficientes. De acuerdo al reglamento para el control sanitario de la leche, la pasteurizada deber contener un mximo de 30,000 mesoflicos aerobios por mililitro y menos de 10 organismos coliformes por mililitro. MATERIAL 1 Mechero Fisher. 4Tubos de ensaye de 15 x 150 2 Pipetas de 10 mL. 4 Pipetas de 1 mL 4 Cajas de petri. 4 Portaobjetos Franela Gradilla APARATO: Microscopio Autoclave. DESARROLLO: I. Preparacin de diluciones. REACTIVOS Colorantes. Solucin salina 0.9% Agar para mtodos estndar. Agar de bilis rojo violeta. Leche bronca, 50 ml.

1. Preparar 4 tubos de ensaye con 9 ml. de solucin salina estril. 2. Realizar diluciones: 10-1 , 10-2 , 10-3 y 10-4 II. Determinacin de Mesoflicos Aerobios (por vaciado en placa). 1. De la dilucin 10-2 y 10-4 agregar 1 ml. de cada dilucin en 2 cajas de petr estriles respectivamente. 2. Agregar 20 ml. del medio de cultivo, (el cual deber estar a 45C aproximadamente) agar estndar, en cada una de las cajas.

3. Homogeneizar la muestra con el medio de cultivo en forma circular. 4. Dejar solidificar e incubar a 37 C de 24 a 48 horas. . III. Determinacin de Coliformes (por vaciado en placa). 1. De la dilucin 10-2 y 10-4, agregar 1 ml en 2 cajas de petri estriles. 2. Agregar 20 mL de medio de cultivo (el cual deber estar a 45C aproximadamente) agar bilis rojo violeta, en cada una de las cajas. 3. Homogeneizar la muestra con el medio de cultivo. 4. Dejar solidificar e incubar a 37C de 24 a 48 horas. RESULTADOS. Contar el nmero de colonias (UFC) que aparecen en las placas, con ayuda del cuenta colonias. Reportar el nmero de mesoflicos aerobios y el nmero de coliformes totales por mililitro de muestra. CUESTIONARIO: 1. Cules son las bacterias que componen el grupo de mesoflicos aerobios? 2. Cules son las bacterias que componen el grupo de coliformes totales? 3. Cules son los microorganismos patgenos que se pueden encontrar en la leche? 4. Cul es el efecto de la pasteurizacin en los microorganismos y cmo se les llama a aquellos microorganismos que no son destruidos por este proceso trmico? 5. Qu otros mtodos se pueden utilizar para determinar la carga microbiana en la leche? C O N C L U S I O N E S. Con base en los resultados obtenidos y en la referencia bibliogrfica, obtener las conclusiones correspondientes.

B I B L I O G R A F A. El alumno consultar un mnimo de tres referencias bibliogrficas