EXCITABILIDAD CELULAR

El gradiente electroqumico:
El potencial de equilibrio. Permeabilidad selectiva.

El potencial de membrana en reposo:

Como se genera. Importancia.

El potencial de accin:
Canales inicos dependientes de voltaje. Generacin del potencial de accin. Propagacin del impulso nervioso.

rvaras@bio.puc.cl

Introduccin

TERMODINAMICA
Los sistemas fsicos intercambian energa (como calor y/o trabajo).
Los sistemas cambian espontneamente hacia estados de mayor probabilidad (entropa). La energa libre de Gibbs (G) es una medida directa de la cantidad de trabajo que realiza un sistema al cambiar de estado: si G < O entonces la reaccin es favorable. si G > O entonces la reaccin es desfavorable.
1. orden G1 G = G2 G1

2. desorden G2

DIFUSION

Transporte pasivo de molculas desde un rea de mayor concentracin hacia una de menor concentracin. Gradiente de concentracin: diferencias en la concentracin de una molcula en el espacio.

DIFUSION
Al colocar una membrana permeable, qu ocurre con las concentraciones de la especie en ambos compartimentos?
e i

t=0

DIFUSION
Al colocar una membrana permeable, qu ocurre con las concentraciones de la especie en ambos compartimentos?
e i

t=

Se lograr un equilibrio* en el cual se igualarn las concentraciones a ambos lados de la membrana. El flujo neto a travs de la membrana ser cero.

FUERZA RESPONSABLE DEL TRANSPORTE DE ESPECIES NO CARGADAS

Gc = -RT ln (Ce/Ci)
G = energa libre de la especie en solucin. R = constante de los gases ideales (2 cal /mol x K). T = temperatura absoluta (K).

es decir (a temperatura constante) las especies no cargadas se movern a favor de su gradiente de concentracin.

FUERZA RESPONSABLE DEL TRANSPORTE DE ESPECIES NO CARGADAS Gc = -RT ln (Ce/Ci)

e i

t=

Habr transporte desde e hacia i cuando Ce > Ci. Qu ocurre si la especie tiene carga elctrica (iones)?

FUERZA RESPONSABLE DEL TRANSPORTE DE ESPECIES CARGADAS

Ejemplo clsico: una sal en solucin (KCl 1M en agua destilada)

K+ Cl-

t=0

La membrana es permeable a los cationes (+) pero no a los aniones (-). [K]e = 0.01M [K]i = 1 M.

FUERZA RESPONSABLE DEL TRANSPORTE DE ESPECIES CARGADAS

Ejemplo clsico: una sal en solucin (KCl 1M en agua destilada)

K+ Cl-

t=

+
El flujo de iones genera una corriente elctrica. Un flujo infinitesimal de K+ genera una diferencia de potencial Vm. La acumulacin de cargas positivas (Vm) dificulta el flujo de K+.

FUERZA RESPONSABLE DEL TRANSPORTE DE ESPECIES CARGADAS G = -zFV

K+ Cl-

t=

z = valencia (carga) del in. F = Cte Faraday (~96500 C/mol). V = (volts).

Se establece un equilibrio dinmico?

FUERZA RESPONSABLE DEL TRANSPORTE DE ESPECIES CARGADAS

G = Gc K+ Cle i

t=

+
Se establece un equilibrio dinmico cuando la fuerza del gradiente de concentracin sea equivalente a la del gradiente elctrico.

El flujo neto a travs de la membrana ser cero.

FUERZA RESPONSABLE DEL TRANSPORTE DE ESPECIES CARGADAS

G = Gc K+ Cle i

t=

zFV = RT ln (Ce/Ci) V = RT ln (Ce/Ci) zF

EL POTENCIAL DE EQUILIBRIO VX = RT ln ([X]e /[X]i) zF

La ecuacin de Nernst permite calcular el potencial de equilibrio para cada in presente en la solucin, es decir el valor del potencial de membrana al cual dicho in est en equilibrio.
recordar que R, z y F son constantes: A 37 C,

Walther H .Nernst (1864-1944)

Vcation = 61.5 mV x log [cation]e / [cation]i Vanion = 61.5 mV x log [anion]i /[anion]e

A 25 C, Vcation = 58 mV x log [cation]e /[cation]i

EL POTENCIAL DE EQUILIBRIO
Volviendo al ejemplo Se establece un equilibrio dinmico?

K+ Cl-

+
A 37 C, VK = 61.5 mV x log [0.01]e /[1]i

VK = -123 mV
Si, se establece un equilibrio dinmico en el cual el Vm generado previene la difusin de K+ a favor de su gradiente de concentracin.

qu sucede en los sistemas vivos?

Recordar:
LA MEMBRANA LIPIDICA

Los lpidos de membrana son molculas anfipticas, que en medio acuoso pueden formar bicapas. Esta bicapa lipdica es impermeable a especies cargadas.

DISTRIBUCION DE IONES EN DISTINTOS COMPARTIMENTOS CORPORALES

LA MEMBRANA CELULAR

7.5 nm !

Protenas integrales (transportadores, canales) permiten el paso selectivo de iones (y otras especies) a travs de la membrana.
Esta permeabilidad selectiva genera gradientes electroqumicos para iones como el Na+, K+, Ca2+, Cl-, etc.

LA MEMBRANA CELULAR Canales inicos

Un canal inico es una protena integral, con un poro acuoso que atraviesa la membrana plasmtica. Son selectivos y su apertura depende de estmulos especficos (potencial de membrana, ligandos qumicos, etc). Transportan 107-8 iones/s (1000 veces ms que los transportadores), de acuerdo a sus gradientes electroqumicos. Cuantos tipos de canales inicos existen?

CANALES IONICOS Superfamilias:

Canales dependientes de voltaje Potencial de accin. Canales independientes de voltaje (de fuga) Potencial de membrana. Canales dependientes de ligandos Neurotransmisores. Otros (canales intercelulares, mecanosensibles, etc.,).
PORO

ABIERTO

CERRADO

CANALES IONICOS
Siempre conducen hacia la zona de menor concentracin

PORO

CERRADO

ABIERTO

cmo se mantienen los distintos gradientes electroqumicos?

TRANSPORTADORES
Un transportador es una protena integral. Pueden transportar iones, pequeas molculas o macromolculas (como otras protenas). El transporte puede ser por difusin facilitada (sin requerimiento energtico) o a travs de transporte activo (requiere energa) Cambio conformacional Cambio conformacional

TRANSPORTADORES
Transportador (Importe/exporte): mueve solutos hacia adentro/afuera. Co-transportador (Simporte): mueve 2 solutos en la misma direccin, gracias al gradiente electroqumico de uno de ellos. Contra-transportador (Antiporte): mueve 2 solutos en direcciones opuestas, gracias al gradiente electroqumico de uno de ellos.

Transportador

Co-transportador

Contra-transportador

TRANSPORTADORES La bomba Na+-K+-ATPasa:

Es una nzima que constantemente bombea Na+ hacia afuera y K+ hacia adentro (electrognica). La energa para el antiporte proviene de la hidrlisis de ATP. Es esencial para el mantenimiento del potencial de membrana en reposo.

Mecanismo propuesto para el funcionamiento de la bomba Na+-K+-ATPasa

EL POTENCIAL DE MEMBRANA EN REPOSO

Los gradientes electroqumicos son mantenidos (principalmente) por la bomba Na+-K+-ATPasa.

En reposo, la membrana es ~50 veces ms permeable a K+ que a Na+, por lo que la salida de K+ desde el interior de la clula (canales de fuga) determina el potencial de membrana en reposo.
La mayora de los aniones (A-) en la clula son protenas grandes y fosfatos que no pueden atravesar la membrana, as cuando el K+ sale de la clula, deja una carga negativa en el interior.

-70 mV

EL POTENCIAL DE MEMBRANA EN REPOSO

Se puede calcular tericamente?
La ecuacin de Goldman-Hodgkin-Katz, permite calcular el potencial de membrana de una clula:

Vm = RT ln (PK [K]0 + PNa [Na]0 + PCl [Cl]i) F (PK [K]i + PNa [Na]i + PCl [Cl]o)
Lo importante es recordar que el potencial de membrana en reposo es un equilibrio dinmico, determinado principalmente por el potencial de equilibrio del K+ y mantenido por la bomba Na+-K+-ATPasa.

Se puede medir experimentalmente?

EL POTENCIAL DE MEMBRANA EN REPOSO

Se puede medir utilizando un microelectrodo, el cual se inserta dentro de la clula, lo que permite medir directamente el potencial de membrana de la clula en estudio. Estas mediciones han permitido establecer que el potencial de membrana en reposo de una clula tpica es de -60 a -80 mV. El potencial de equilibrio del K+ es de aprx. -80 a -90 mV

VK = -90 mV VNa = +55 mV

VCl = -75 mV
VCa = +120 mV Vm = -70 mV

EL POTENCIAL DE MEMBRANA EN REPOSO

Cul es su importancia?
Por definicin es energa almacenada (volt = Caloras/Coulomb). Capacidad de generar trabajo que tiene un sistema. Sin embargo, para poder utilizar esta energa almacenada la clula debe ser capaz de responder a uno o ms estmulos, es decir debe ser una clula excitable. Los canales inicos dependientes de voltaje le confieren a la clula la capacidad de ser elctricamente excitables.

EXCITABILIDAD CELULAR La apertura de un canal de Na+V

1 2

mV

-70

2
ms

y si fuese un canal de K+, que pasara?

EXCITABILIDAD CELULAR La apertura de un canal de K+V

1 2

mV

-70

Qu pasa si tenemos ambos canales, de Na+ y K+?

ms

EXCITABILIDAD CELULAR Canales de Na+V y canales de K+V

1 2

mV

-70

?
ms

EL POTENCIAL DE ACCION

Al estimular elctricamente la clula, los canales de dependiente de voltaje se abren. El canal de Na+ se abre ms rpido que el canal de K+, el efecto neto es una despolarizacin. Los canales de Na+ comienzan a cerrarse y los de K+ se abren, el efecto neto es una repolarizacin. Mientras los canales K+ estn abiertos, el potencial de membrana se acercar al potencial de equilibrio del K+ (hiperpolarizacin).

EL POTENCIAL DE ACCION La pelcula:

EL POTENCIAL DE ACCION

depende de las velocidades de apertura y cierre de los canales inicos involucrados (generalmente Na+ y K+)

EL POTENCIAL DE ACCION

distintas formas de potencial de accin reflejan los distintos canales inicos involucrados en su generacin.

EL POTENCIAL DE ACCION
La ley del todo o nada:
El umbral de excitacin representa el valor mnimo al cual debe despolarizarse la membrana para generar un potencial de accin. Representa el valor al cual se activan masivamente los canales inicos. Esto ltimo implica que el potencial de accin siempre tendr la misma amplitud.

Qu sucede con el potencial de accin si se llega a niveles supraumbrales de excitacin?

EL POTENCIAL DE ACCION
El perodo refractario:
Durante el perodo refractario absoluto no es posible generar un segundo potencial de accin. Durante el perodo refractario relativo es posible generar un nuevo potencial de accin, el cual sin embargo ser de menor amplitud. Por qu ocurre este fenmeno? Esto se debe a que los canales inicos necesitan un tiempo mnimo (decenas de milisegundos) en volver a su estado inicial.
P.R. Absoluto
P.R. Relativo

Vm

(mV)

tiempo (ms)

EL POTENCIAL DE ACCION
Propagacin:

En una neurona, el potencial de accin es regenerado a lo largo de todo el axn, como en una serie de estaciones de relevo.

PROPAGACIN DEL IMPULSO NERVIOSO

Cmo ocurre?
Flujos de corriente desde la regin activa, despolarizan regiones adyacentes de la membrana. Canales de Na+ dependientes de voltaje se activan en esta regin. Un nuevo potencial de accin es gatillado en la regin adyacente. Esta secuencia se repite a lo largo de todo el axn (dendrita, etc.). Los potenciales de accin no decaen en intensidad mientras se conducen a lo largo del axn.

PROPAGACIN DEL IMPULSO NERVIOSO

Propagacin unidireccional:
El potencial de accin se propaga en una direccin, desde el cono axonal hacia las terminaciones nerviosas. La regin por la cual recin pas el potencial de accin no puede volver a ser estimulada por el flujo de corrientes locales. Por qu? El perodo refractario Alguna otra consecuencia? Limita la frecuencia de descarga

PROPAGACIN DEL IMPULSO NERVIOSO

Velocidad de conduccin:
~ 360 Km/hr!!

Mientras mayor sea el dimetro de la fibra (axn), ms rpido se conduce el impulso nervioso.

PROPAGACIN DEL IMPULSO NERVIOSO

Propagacin saltatoria:

Muchas neuronas tienen una capa alrededor de su axn llamada capa de mielina, la cual es producida por clulas de Schwann (periferia) y oligodendrocitos (central).

PROPAGACIN DEL IMPULSO NERVIOSO

Propagacin saltatoria:

La capa de mielina est interrumpida por regiones de membrana desnuda llamadas Ndulos de Ranvier en donde los canales inicos estn ltamente concentrados Los potenciales de accin saltan de un ndulo a otro sin despolarizar la regin aislada por la mielina. Este fenmeno se llama Propagacin saltatoria.

PROPAGACIN DEL IMPULSO NERVIOSO

Ndulos de Ranvier:

PROPAGACIN DEL IMPULSO NERVIOSO

Desmielinizacin:
Fenmeno asociado a enfermedades autoinmunes neurodegenerativas, como la Esclerosis Mltiple, en las cuales los propios linfocitos T no reconocen la mielina. Esto genera un evento inflamatorio (citoquinas, etc) que activa a otras clulas del sistema inmune, por lo que la enfermedad se vuelve ms agresiva. La desmielinizacin de las fibras enlentece la transmisin de impulsos entre el SNC y otras partes del cuerpo. Sntomas: descordinacin motora, dificultades cognitivas, fatiga crnica.

PROPAGACIN DEL IMPULSO NERVIOSO

Anestsicos locales:
Sustancias que inhiben reversiblemente la conduccin del impulso nervioso. Dependiendo la regin de aplicacin, pueden provocar analgesia y/o parlisis. Mecanismo de accin: La gran mayora son bloqueadores (reversibles) de los canales de Na+ dependientes de voltaje, previniendo la propagacin del impulso nervioso. Efectos secundarios? Sistema nervioso y corazn.

ANESTESICOS LOCALES
Cocana y sus derivados:
Utilizada por los chamanes incas desde hace miles de aos. 1860: Niemman aisl el alcaloide cocana desde una preparacin de hojas de coca. 1884: Koller introdujo el uso de cocana como analgsico en oftalmologa. 1898: H.Quincke ocup cocana como anestsico espinal. 1905: Einhorn sintetiz el derivado procana (Novocana). Otros derivados ms contemporneos: bupivacana, etidocana, prilocana.
Cocana Erythroxylum coca

ANESTESICOS LOCALES
Efectos sobre el potencial de accin: Disminuyen:
Amplitud del potencial de accin. Velocidad de despolarizacin. Velocidad de conduccin.
A-D, concentraciones crecientes

Aumentan:
Umbral de disparo. Duracin del perodo refractario.

EN RESUMEN
Conceptos que debe dominar: Equilibrio dinmico. Potencial de equilibrio. Potencial de membrana en reposo.

Canales inicos activados por voltaje

Potencial de accin.

?
rvaras@bio.puc.cl