VETORES DE CLONAGEM MOLECULAR Aps o isolamento de uma informao gentica, por exemplo um fragmento de DNA obtido pela clivagem

com enzimas de restrio, este fragmento dever ser inserido numa outra molcula de DNA diferente, capaz de amplificar aquela informao gentica em centenas de cpias. Este processo de amplificao obtido atravs do uso de molculas de DNA que so os chamados vetores de clonagem molecular. Atualmente, os tipos bsicos de vetores usados na tecnologia do DNA recombinante apresentam caractersticas especiais que os tornam excelentes veculos de clonagem em diferentes situaes. A seguir, vamos apresentar o principal tipo de vetor atualmente em uso na biologia molecular. PLASMDEO So pequenas molculas de DNA dupla fita, circular, contendo os elementos necessrios para a sua replicao e pelo menos um gene que confere resistncia a antibitico. So elementos genticos extra cromossomais que variam de 5 a 400 Kbp (1Kbp = 1000 pares de bases) e comumente esto presentes em duas ou mais cpias por clula, podendo chegar a centenas. Os plasmdeos presentes num grande nmero de cpias so usados como veculos de clonagem desde que capacitem a amplificao do segmento do DNA neles clonado. Um plasmdeo para ser um bom vetor de clonagem deve conter as seguintes propriedades: a) possuir uma origem de replicao (O), ou seja, uma seqncia de DNA que permita que o vetor seja replicado na clula hospedeira, b) apresentar stios nicos de clivagem para enzimas de restrio. O conjunto destes stios denominado de Stio Mltiplo de Clonagem (SMC) e o local onde o inserto incorporado ao vetor de clonagem, c) possuir um gene que codifica um produto que distingue a clula com plasmdio da clula sem plasmdio. Por exemplo, muitos vetores de clonagem carregam o gene que confere resistncia ampicilina (AmpR). As clulas que recebem tais vetores so capazes de crescer em meio contendo o antibitico, enquanto que as clulas que no o receberam acabam morrendo. A figura ao lado ilustra as principais caractersticas estruturais de um plasmdeo.
Esquema de um plasmdeo tpico usado em clonagem molecular.

Um dos passos fundamentais no processo de clonagem molecular o uso de enzima de restrio que produz extremidades compatveis durante a clivagem do DNA a ser clonado (inserto) e a do DNA receptor (vetor). Uma vez que o DNA foi ligado ao vetor, esta molcula hbrida dever ser introduzida numa clula hospedeira, geralmente bactrias, por um processo chamado de transformao, para que o vetor possa sofrer replicaes e conseqentemente amplificar o nmero de cpias do inserto. A bactria transformada ser facilmente reconhecida pela aquisio de um novo fentipo dado pelo plasmdeo, ou seja, capacidade de crescer em meios contendo antibitico. Assinale VERDADEIRO (V) ou FALSO (F) ( ) Uma bactria capaz de passar seu plasmdio para outra, conferindo a ela novas caractersticas. ( ) O DNA cromossmico pode ser trocado entre bactrias. ( ) Os plasmdios no existem na natureza, tendo sido criados pelo homem. ( ) Todas as bactrias, sem exceo, possuem plasmdios. ( ) Plasmdios codificam apenas fatores de resistncia a antibiticos. ( ) Os plasmdios geralmente conferem vantagens s bactrias que os possuem, e, portanto, h uma presso evolutiva para a sua manuteno nas clulas. ( ) Os plasmdios s se duplicam quando o DNA genmico duplicado. ( ) Todos os descendentes da bactria com plasmdio tambm o tero, pois este obrigatoriamente passado para as descendentes. ( ) O ser humano capaz de construir molculas como os plasmdios incluindo as alteraes de seqncia de nucleotdios que desejar. ( ) Os plasmdios so bem menores que o DNA cromossmico. ( ) Os plasmdios utilizados na transformao bacteriana so os mesmo utilizados para transformar clulas de mamferos, j que basta ter os elementos citados no texto. ( ) Os laboratrios que trabalham com bactrias transformadas necessitam de uma licena especial, alm de ter que seguir normas pr-estabelecidas de biossegurana.