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PROTENAS
QU ES UNA PROTENA?
Las protenas son macromolculas formadas por cadenas lineales de aminocidos.
El trmino protena proviene de la palabra francesa protine y esta del griego (proteios), que significa 'prominente, de primera calidad
Son las biomolculas ms verstiles y ms diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del organismo.
Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, entre las que destacan: Estructural. Esta es la funcin ms importante de una protena (Ej: colgeno), Inmunolgica (anticuerpos), Enzimtica (Ej: sacarasa y pepsina), Contrctil (actina y miosina). Homeosttica: colaboran en el mantenimiento del pH (ya que actan como un tampn qumico), Transduccin de seales (Ej: rodopsina) Protectora o defensiva (Ej: trombina y fibringeno)
Una clula contiene millones de protenas distintas, separarlas y determinar su estructura es extremadamente difcil. La purificacin depende de lo que se va a determinar en una protena: Peso Molecular Punto isoelctrico numero de subunidades numero de aminocidos tipo de aminocidos secuencia de aminocidos
La fraccin que nos interesa debe ser en principio separada, para posteriormente proceder a aislar y purificar la biomolcula contenida en la misma.
En la tabla se muestra un resumen de los principales mtodos empleados para purificar y aislar biomolculas, estos mtodos normalmente se combinan para lograr la forma pura de las biomolculas (sin contaminacin de otras).
PURIFICACIN DE PROTENAS
Para estudiar detalladamente las propiedades de cualquier protena es preciso contar con una muestra homognea que slo contenga molculas de un tipo. Las tcnicas de separacin se concentran en el tamao, la carga y la polaridad, que es donde residen las diferencias de las molculas. Se aplican muchas tcnicas para eliminar contaminantes y lograr una muestra pura de la protena de inters. El porcentaje de recuperacin indica cunto de la protena de inters se ha conservado en cada paso.
CENTRIFUGACIN DIFERENCIAL
Despus de la homogeneizacin, las clulas se someten a centrifugacin diferencial, la muestra se hace girar a unas 500 veces la fuerza de la gravedad (500 x g). Si la protena deseada no se consigue, entonces la velocidad aumenta, por ejemplo a 10 000 x g, para separar las mitocondrias y as hasta obtener las protenas deseadas para su investigacin. Una vez solubilizadas, se someten a una purificacin burda, comnmente hecha con el sulfato de amonio y a esto se le conoce como precipitacin por sales.
CROMATOGRAFA
La etimologa de la palabra cromatografa, viene del griego khromatos, que significa color, y graphia, que quiere decir escritura. La cromatografa es un mtodo de separacin de diferentes componentes de una muestra, logra la separacin de los mismos a travs del paso de una muestra por una fase estacionaria con la ayuda de la fase mvil, cada componente de la muestra tiene propiedades particulares que permitir su interaccin en forma diferente entre las fases. El objetivo principal de un estudio cromatografa es lograr la separacin de todos los componentes en una muestra.
* Cromatografa de columna
Esta tcnica comenz a usarse a principios del siglo XX para separar pigmentos vegetales cuyos colores se distinguan con facilidad, pero en la actualidad es posible separar compuestos incoloros; se basa en el hecho de que diferentes compuestos pueden distribuirse en distinto grado entre diferentes fases, o porciones separables de materia, se compone de 2 fases, estacionaria y la mvil que fluye sobre el material estacionario y se lleva consigo la muestra a separar. El material que se constituye en la fase estacionaria se empaca en una columna, la fase mvil se pasa a travs de la columna.
* Cromatografa de columna
Electroforesis
La electroforesis se basa en el movimiento de partculas cargadas en un campo elctrico, hacia un electrodo con carga opuesta. La movilidad de las macromolculas depende de su carga, forma y tamao. Aunque se han usado muchos medios de soporte para electroforesis, que incluyen papel y lquidos, el soporte ms comn es un polmero de agarosa o acrilamida similar a los empleados en cromatografa de columna. Se aplica una muestra a depresiones moldeadas en el medio de soporte. Se hace pasar una corriente elctrica por el medio, a un voltaje controlado, para lograr la separacin deseada, una vez que las protenas se separan en el gel se tie para revelar la ubicacin de las protenas.
*Electroforesis
Electroforesis Bidimensional