Mtodos de coleta, preservao e processamento de amostras fecais

Profa Dra Carolina G. P. Beyrodt

Coleta
Fatores considerados:

tipo de recipiente utilizado para colheita; idade da amostra; volume de material; utilizao de medicamentos interferentes.

Coleta das fezes: recomendaes

As fezes, diarreicas ou no, devem ser recolhidas em recipiente limpo e seco, de boca larga e vedao hermtica. A coleta deve ser realizada diretamente no frasco ou em papel limpo e transferida imediatamente para o frasco. A coleta no deve ser feita do vaso sanitrio ou do solo. Quantidade mnima de amostra por frasco (coletor universal): 20 a 30 g. Colher 3 amostras em dias alternados*

* Alguns parasitas apresentam intermitncia na eliminao das formas parasitrias. Ex. Giardia lamblia

Coleta das fezes: recomendaes

No contaminar com urina Colher 3 amostras em dias alternados* No ingerir medicamentos antibiticos, antidiarricos, hidrxido de magnsio, brio e leo mineral. Se ocorrer, aguardar de 10 a 14 dias. Amostra aps utilizao de laxante: ao paciente em jejum, tendo recebido alimentao leve no dia anterior, administra-se um purgativo salino (30 gramas de sulfato de sdio ou magnsio, para adulto). Recolhe-se o material desprezando-se a primeira evacuao.

Amostras com conservante ou fixador podem reunir fezes colhidas em dias alternados no mesmo frasco ou em trs frascos diferentes, sendo o ltimo com material sem conservante.

As amostras encaminhadas ao laboratrio devem vir acompanhadas da requisio mdica e devem trazer informaes no frasco como:

nome do paciente nmero de identificao idade data e horrio da colheita nome do mdico (opcional)

Preservao das amostras:

A Refrigerao (3-5C):

preservao de ovos e cistos por vrios dias

larvas de Strongyloides stercoralis e de ancilostomdeos podem sofrer alteraes morfolgicas, assim como trofozotas de protozorios.

Preservao das amostras:

A Utilizao de fixadores ou conservantes:

Formaldeido 5% MIF (mertiolato-iodo-formaldedo) SAF (acetato de sdio-cido actico-formaldedo) APV (lcool polivinlico) Schaudinn Para oocistos de coccdeos: formaldedo 10% ou bicromato de potssio

Exame de Fezes
Anlise Macroscpica
So analisadas caractersticas consistncia, cor e odor como

* Permite a observao de vermes adultos como Ascaris lumbricoides, Enterobius vermiculares, Trichuris trichiura e proglotes de Taenia sp.

Exame de Fezes - Procedimentos

I. Mtodo Direto
Observao de pequena amostra fecal misturada com soluo salina
* Procedimento eficaz apenas altas parasitemias. um mtodo bastante econmico, mas requer bastante prtica por parte do examinador. Deve ser utilizado juntamente com outras tcnicas.

Leitura das lminas:

Objetivas menores para objetivas maiores

II. Mtodos de Enriquecimento

1. Mtodo de Sedimentao (Lutz, Hoffman, Pons e Janer) Princpio: Sedimentao espontnea Finalidade: Mtodo de escolha para a pesquisa de ovos pesados, sendo muito til tambm para a pesquisa de outros ovos e larvas de helmintos e cistos de protozorios.

II. Mtodos de Enriquecimento

2. Mtodo de Faust e colaboradores Princpio: Concentrao baseado na centrifugo-flutuao em sulfato de zinco de densidade 1,180. Finalidade: Tcnica especfica para cistos de protozorios e ovos de helmintos (ovos de Schistosoma mansoni e ovos infrteis de Ascaris lumbricoides podem no ser evidenciados por esse mtodo).

II. Mtodos de Enriquecimento

3. Mtodo de Ritchie e colaboradores Tambm conhecido por mtodo de concentrao em formlter. Princpio: Centrfugo-sedimentao. Finalidade: recomendado para cistos de protozorios e ovos de helmintos, incluindo os ovos de Schistosoma mansoni.

* O Mtodo de Blagg e colaboradores (MIFC) semelhante ao mtodo

de Ritchie partindo de amostra de fezes preservada em conservante MIF

II. Mtodos de Enriquecimento

4. Mtodo de Willis Princpio: Flutuao em soluo saturada de NaCl. Fundamenta-se na dupla propriedade de certos ovos de helmintos de flutuar em soluo de alta densidade e aderir superfcie de vidro. Finalidade: Ideal para a pesquisa de ovos leves e semi-leves de helmintos.

III. Mtodos para deteco de larvas

1. Mtodo de Baermann-Moraes Princpio: Termotropismo e hidrotropismo das larvas. Finalidade: Utilizada originalmente para isolar larvas de nematides do solo. Adaptada para a extrao de larvas das fezes, principalmente as de Strongyloides stercoralis. * Recomenda-se a utilizao de fezes recm-colhidas, sem conservantes.

III. Mtodos para deteco de larvas

2. Mtodo de Rugai e colaboradores Princpio: termotropismo e hidrotropismo positivos. Modificao do mtodo de Baermann Finalidade: Deteco de larvas de Strongyloides stercoralis. uma tcnica econmica, higinica e simples. Oferece vantagens e tem sido largamente utilizada.

IV. Mtodos de Contagem

1. Mtodo de Stoll utilizado para avaliar quantitativamente as infeces causadas por ancilostomdeos. O nmero de ovos de outros helmintos tambm pode ser avaliado por essa tcnica e a quantidade de vermes albergada pelos pacientes calculada, levando-se em conta a consistncia das fezes atravs de constantes previamente estabelecidas.

IV. Mtodos de Contagem

2. Mtodo de Kato-Katz Esta tcnica uma adaptao do mtodo de Kato-Mira para torn-la quantitativa. simples e de fcil execuo, sendo o mtodo de escolha para a pesquisa de helmintos, sobretudo Schistosoma mansoni.
* No recomendado para contagem de ovos de ancilostomdeos e Hymenolepis nana (aps uma hora de preparo) ou para visualizao de protozorios e larvas de helmintos.

IV. Mtodos Especiais e de Colorao

1. Anal Swab (Mtodo de Graham ou da Fita Gomada) Mtodo baseado na biologia do Enterobius vermicularis. As fmeas migram para a regio anal e perianal, onde fazem sua desova; os ovos permanecem aderidos mucosa nessa regio. Assim, so facilmente coletados com fita adesiva. Eventualmente pode ser utilizado para coletar ovos de Taenia.

V. Mtodos Especiais e de Colorao

2. Tamisao das fezes

Mtodo para pesquisa de proglotes de Taenia, por meio de lavagem e peneiragem das fezes coletadas durante 24 horas. Este processo oferece vantagem por permitir o diagnstico diferencial entre T. solium e T. saginata aps clarificao e observao das proglotes. indicado tambm para o controle de cura das tenases.

V. Mtodos Especiais e de Colorao

3. Hematoxilina Frrica Mtodo de colorao para protozorios intestinais, permite estudo morfolgico detalhado. uma tcnica complicada por apresentar vrias etapas para sua execuo. Outra coloraes com o mesmo princpio: Tricrmica

V. Mtodos Especiais e de Colorao

4. Colorao de Kinyoun Mtodo de colorao utilizado para o diagnstico de parasitas protozorios intestinais oportunistas, como Cryptosporidium e Isospora. Cora estruturas lcool-cido resistentes com fucsina contrastadas com verde-malaquita.
* Outras coloraes com o mesmo princpio: Ziehl-Nielsen, Safranina e outras.

V. Mtodos Especiais e de Colorao

5. Colorao de Chromotrope Colorao Tricrmica) 2R (Modificao da

Mtodo de colorao utilizado para o diagnstico de parasitas protozorios intestinais oportunistas, como esporos de Microspordios. O princpio da tcnica visa produzir contraste entre os artefatos de fundo da preparao e os parasitos presentes.

Parasitas Intestinais
Protozorios
Giardia lamblia Entamoeba histolytica Entamoeba coli* Iodamoeba butschilli* Endolimax nana* Cryptosporidium parvum Isospora belli Cyclospora caetanensis

(diagnosticados por exames de fezes)

Cisto ou trofozota Cisto ou trofozota Cisto ou trofozota Cisto ou trofozota Cisto ou trofozota Oocisto Oocisto Oocisto

Platelmintos
Taenia sp Hymenolepis nana Hymenolepis diminuta Schistosoma mansoni Ovo Ovo Ovo Ovo

Nematelmintos
Ascaris lumbricoides Enterobius vermicularis Trichuris trichiura Ancylostoma duodenale Necator americanus Strongyloides stercoralis Ovo (frtil ou infrtil) Ovo Ovo Ovo ou larva** Ovo ou larva** Larva

*amebas no patognicas para o homem ** somente em fezes mantidas no laboratrio por mais de 24 horas