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El objetivo de realizar este anlisis es conocer el nmero de microorganismos aerobios mesfilos (RAM) que contiene un alimento.

Este mtodo es uno de los indicadores microbiolgicos de calidad mas utilizado. Se aplica a todos los alimentos con excepcin de los productos fermentados o madurados tales como queso, ciertos tipos de embutidos, yogurt , etc. Aspectos generales sobre Recuento microorganismos aerobios mesfilos Los resultados de este anlisis permiten: Verificar efectividad de los procedimientos de limpieza y desinfeccin. Determinar si las temperaturas aplicadas en los procesos fueron las adecuadas. Determinar el origen de la contaminacin durante los procesos de elaboracin de los alimentos. Verificar condiciones ptimas de almacenamiento y transporte. Obtener informacin acerca de la vida til de los alimentos. Indicar alteracin incipiente en ciertos alimentos.

Descripcin de Actividades El Laboratorio de Recuento perteneciente a la Seccin Microbiologa del Subdepartamento Laboratorios del Ambiente, est encargado de realizar los anlisis de Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos (RAM), Recuento o NMP de S. aureus, Recuento de mohos y levaduras en alimentos y aguas. Adems realiza Deteccin de toxina de S. aureus en cepas aisladas de alimentos, deteccin de Nucleasa termoestable en alimentos y Recuento de microorganismos Hetertrofos en aguas de dilisis. Capacitar a los profesionales y transferir las tcnicas analticas a los Laboratorios Ambientales de la Red del Sistema Nacional de Servicios de Salud, con el fin de que puedan realizar a nivel regional los anlisis contemplados en la reglamentacin sanitaria vigente

Prestaciones analticas

Anlisis Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos (RAM) en alimentos Recuento de S. aureus en alimentos NMP de S. aureus en alimentos Recuento de mohos y levaduras en alimentos Deteccin de Nucleasa termoestable en alimentos Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos (RAM) en agua Recuento de S. aureus en agua Recuento de mohos y levaduras en agua Deteccin de toxina de S. aureus en cepas aisladas de alimentos Recuento de microorganismos Hetertrofos en placa

Cdigo 8321001 8321002 8321003 8321004 8321005 8321006 8321007 8321008 8321010 S/N

Anlisis Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos (RAM) en alimentos

Mtodos Recuento en placa, siembra en profundidad. Para anlisis de productos congelados, refrigerados, precocidos, o preparados. Bacteriological Analytical Manual Online. Enero 2001 Recuento de S. aureus en alimentos Recuento en placa siembra en superficie. Bacteriological Analytical Manual Online. Enero 2001 NMP Staphylococcus aureus en alimentos NMP. Bacteriological Analytical. Manual Online. Enero 2001 Recuento de mohos y levaduras en Recuento en placa, siembra en alimentos profundidadICMSFMicroorganismos de los alimentos. Tcnicas de anlisis microbiolgico Vol I- 2 Ed Deteccin de Nucleasa termoestable en Tatini-Cords-Gramoli. Screening for alimentos Staphylococcal Enterotoxins in Foods. Food Technology April 1976, Lachica -Hoeprich Metachromatic agar diffusion microslide technique for detecting staphylococcal nuclease in foods. Appl. Microb. 168-169, Jan 1972 Recuento de Microorganismos Aerobios Recuento en placa, siembra en Mesfilos (RAM) en agua profundidad.Standard Methods for Examination of Water and Wastewater 19th Ed 1995 Recuento de S. aureus en agua Recuento en placa siembra en superficie. Bacteriological Analytical Manual Online. Enero 2001 Recuento de mohos y levaduras en agua Recuento en placa, siembra en profundidadICMSFMicroorganismos de los alimentos. Tcnicas de anlisis microbiolgico Vol I- 2 Ed. Deteccin de toxina de S. aureus en cepas Tcnica Aglutinacin Reversa Pasiva en aisladas de alimentos Ltex (R P L A) Igarashi H. and Sugiyama J. 1987. Reversed passive latex aglutination test for the rapid and simple detection of bacterial toxins. Culture Oxoid. vol 8 N 1

Recuento de microorganismos Hetertrofos Recuento en placa, siembra en en placa profundidadStandard Methods for Examination of Water and Wastewater 19th Ed 1995 Condiciones de Toma de Muestra y Cantidad de muestra solicitada: Ver especificaciones para la recoleccin y transporte de muestras ambientales: Especificaciones para la recoleccin de muestras de agua clorada y no clorada para anlisis microbiolgico Especificaciones para la recoleccin de muestras de agua de dilisis para anlisis microbiolgico Especificaciones para la recoleccin de muestras de alimentos Especificaciones para la recoleccin de conservas Especificaciones de envo de cepas para estudio

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AANNLLIISSIISS//EENNSSAAYYOO
5.1 Captacin y envo de la muestra

La captacin de las muestras no es una actividad incluida en la competencia del laboratorio acreditado para este anlisis. Para este tipo de anlisis no se utilizarn contramuestras. La toma y envo de muestras deben ser realizada por el Mdico Veterinario Oficial del SAG (MVO), el cual debe adjuntar las muestras a un Protocolo Oficial SAG, en cuyo documento debe sealar al menos la identificacin de cada una de ellas, el tipo de muestras, la fecha y la hora de la recoleccin de stas. Lo anterior debe realizarse de acuerdo a lo definido en el Manual de Procedimientos para Muestreo Microbiolgico Oficial en Carnes faenadas en Mataderos de Exportacin. SAG, ltima versin vigente.

5.2 Recepcin y manejo de la muestra

La recepcin y manejo de las muestras en el laboratorio debe realizarse de acuerdo a lo sealado en el Manual de Procedimientos para Muestreo Microbiolgico Oficial en Carnes faenadas en ag. 5 de 9Instructivo tcnico para Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos Mediante Tcnica Petrifilm AOAC Official Method 990.12. Cdigo: IT-LAB-14-v01 Mataderos de Exportacin. SAG. Chile 2005. Cabe sealar, la importancia de verificar los siguientes puntos: 1 2 3 4 5 Temperatura de recepcin (rango aceptado: 4 8 C). Tiempo entre la toma de muestras y la recepcin, ya que DEBEN SER PROCESADAS DENTRO DE LAS 24 HORAS DESDE LA TOMA DE LAS MUESTRAS. Integridad de las muestras. Cantidad suficiente de muestras para el anlisis. Identificacin adecuada.

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Contenedor con sello SAG intacto. Protocolo fuera del contenedor y con los datos requeridos de acuerdo al Manual anteriormente mencionado.

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5.3 Metodologa
5.3.1 Caractersticas del procedimiento de ensayo

Las placas Petrifilm para el Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos estn diseadas para determinar las poblaciones totales de bacterias aerobias. Se basa en el crecimiento de colonias de la flora aerobia mesfila que lleva la muestra. El diseo de esta placa presenta una pelcula con nutrientes y agentes gelificantes soluble en agua y un indicador rojo de Tetrazolio para brindar un mejor contraste y facilitar el recuento. 1 1 5.3.2 Preparacin de la muestra Piel cuello de ave

2 - Aspticamente pesar a lo menos (manteniendo relacin 1:10 con el diluyente) 10 0.1 g de muestra representativa dentro de una bolsa estril Stomacher. 3 - Agregar 90 ml de Diluyente Butterfields Tamponado. Esta dilucin es denominada 10 -1. No usar tampones que contengan citrato, bisulfito o tiosulfato con las placas Petrifilm, ya que pueden inhibir el crecimiento. 4 - Homogenizar la muestra en equipo Stomacher por 1 minuto a velocidad media. 5 - Luego depositar 1 ml de esta dilucin de acuerdo a lo descrito en punto 5.3.3. 6 - La siembra en duplicado queda a criterio del laboratorio, para lo cual se debe repetir el procedimiento antes descrito. 7 - A partir de la dilucin anterior tomar 1 ml y depositarlo en un tubo que contenga 9 ml de Diluyente Butterfields Tamponado. Esta dilucin es denominada 10 -2. Con estas 2 diluciones se contina en el punto 5.3.3. 8 - En caso de ser necesario, el laboratorio puede realizar ms diluciones sucesivas con el objeto de obtener placas con recuentos contables. de 9Instructivo tcnico para Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos Mediante Tcnica Petrifilm AOAC Official Method 990.12. Cdigo: IT-LAB-14-v01 1 5.3.3 Protocolo de trabajo 1 - Rotular las placas Petrifilm con la identificacin de las muestras y la dilucin correspondiente. 2 - Colocar la placa Petrifilm Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos en una superficie plana. 3 - Levantar el film superior e inocular 1 ml de la dilucin decimal apropiada en el centro del film inferior. 4 - Bajar cuidadosamente el film superior encima de la muestra, evitando la formacin de burbujas de aire. 5 - Colocar el aplicador con la cara lisa hacia arriba en el centro de la placa. 6 - Presionar ligeramente el centro del aplicador para distribuir la muestra uniformemente. Distribuir el inculo por toda el rea de crecimiento del Petrifilm antes de que se forme el gel. No deslizar el aplicador por el film. 7 - Sacar el aplicador y esperar al menos un minuto para permitir que solidifique el gel.

8 - Por cada dilucin existente siembre en una o dos placas. 9 - Incubar las placas en posicin horizontal, cara arriba, en pilas de hasta 20 placas. La incubadora debe estar humidificada 10 - Incubar las placas Petrifilm Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos por 48 3 hrs a 35C 1C.

5.4 Clculo y expresin de los resultados

1 - Contabilizar todas las colonias rojas de borde regular, independientemente del tamao o intensidad en el color. 2 - El rea de crecimiento circular del Petrifilm es aproximadamente de 20 cm 2. Pueden realizarse estimaciones en placas que contengan ms de 300 colonias contando el nmero de colonias en uno o ms cuadrados representativos y obteniendo el promedio. Multiplicar dicho nmero por 20 para obtener el recuento total por placa. 3 - Altas concentraciones de colonias en las placas ocasionar que toda el rea de crecimiento se vuelva roja o rosada. Ocasionalmente, en placas demasiado cargadas, el centro de la placa puede carecer de colonias visibles, pero pueden apreciarse muchas colonias pequeas en los bordes. Cuando esto ocurre, diluir ms la muestra para obtener un recuento ms preciso. 4 - Algunos organismos pueden licuar el gel, pudindose producir una difusin que oculte la presencia de otras colonias. Si la licuacin del gel interfiere con el recuento, debe realizarse un recuento estimado contando las reas no afectadas. 5 - Tras la incubacin, las placas pueden conservarse, para recuentos posteriores, en congelacin a temperaturas bajo o igual a los 15 C por un mximo de una semana, para efectuar el conteo. Esto es slo para casos de emergencia, no se debe establecer como procedimiento rutinario. 3 5.4.1 Clculo e informe de los recuentos en placa

1 - Seleccionar las placas que presenten un rango de conteo entre 30 300 colonias. Pag. 7 de 9Instructivo tcnico para Recuento de Microorganismos Aerobios Mesfilos Mediante Tcnica Petrifilm AOAC Official Method 990.12. Cdigo: IT-LAB-14-v01 1 - Para muestras de piel de cuello, en caso de realizar diluciones en duplicado se deben promediar el N colonias encontradas en ambas placas de la misma dilucin y multiplicar por el inverso de la dilucin. En caso de realizar slo una placa en diluciones consecutivas, registrar el nmero de colonias de cada dilucin, multiplicar por el inverso de la dilucin y luego determinar el promedio del recuento bacteriano entre ambas diluciones. 2 - Los recuentos se informarn con 2 dgitos. Cuando el tercer dgito es 5, agregar una unidad al segundo dgito si ste es impar y mantener el segundo dgito si ste es par. Usar ceros para los dems dgitos hacia la derecha. 3 - Se informar como UFC/ g. 4 incontables se i- En el caso de valores obtenidos sobre o bajo el rango deben ser informados como Recuento Estimado en Placa (RESP). 5 - En caso de recuentos nformar como Muy Numeroso Para Contar (MNPC). 6 - En caso de no obtener desarrollo en las placas se debe informar de acuerdo al lmite de deteccin de la tcnica. Ejemplo: < 10 UFC / g Muestras de piel de

Efecto del mtodo de toma de muestras sobre el recuento de microorganismos aerobios mesofilos y enterobacterias en superficie de canales de porcino [Effect of the Sampling method on total aerobic viable counts and enterobacteriaceae counts in surface of p
Bernardo Martnez Navaln, CSP Alzira (Conselleria de Sanidad)
Abstract Introduccin: El Reglamento (CE) 2073/2005 establece los criterios de higiene del proceso de produccin en los mataderos basndose en el recuento de microorganismos aerobios mesfilos (RA) y de enterobacterias (RE) de muestras tomadas mediante el mtodo destructivo. Adems indica que los explotadores de los mataderos podrn usar otros procedimientos de toma de muestras si pueden demostrar que proporcionan al menos garantas equivalentes. El anlisis de los alimento y piensos para
determinar la existencia, tipo y nmero de microorganismos es bsico para la microbiologa de alimentos. Sin embargo ninguno de los mtodos utilizados habitualmente permite determinar el nmero exacto de microorganismos que existe en un determinado alimento.

Objetivo: Evaluar la eficacia del mtodo del hisopado en la recuperacin de microorganismos aerobios mesfilos y enterobacterias de la superficie de canales de porcino. Material y mtodos: Se han recogido muestras de superficie de canales a 40 porcinos por el mtodo de escisin y por hisopado La misma persona muestreo cada canal por ambos mtodos en 4 zonas distintas (zona perianal, lomo, pecho y cuello) siguiendo las instrucciones de la Decisin 2001/471/CE. Dentro de las 24 horas siguientes a la recogida de las muestras se efectu la siembra para el RA en agar PCA y el RE en agar VRBG. Los resultados se transformaron a escala logartmica (Log ufc/cm2) y los anlisis estadsticos se han realizado con el programa SAS. Resultados: Los microorganismos aerobios se detectaron en todas las canales por ambos mtodos y las enterobacterias en el 77,5% y 72,5% de las canales muestreadas por escisin e hisopado respectivamente. Los RA y RE (Log ufc/cm2) hallados a partir de muestras obtenidas por escisin (4,29 y 2,01 respectivamente) fueron significativamente (p<0.001) ms elevados a los valores obtenidos por hisopado (2,95 y 0,78). El valor medio de la relacin entre el RA de escisin y RA de hisopado de cada canal fue 53,09; por tanto el hisopado solo recuper, por trmino medio, el 1,88% de los microorganismos aerobios.
Recuento de aerobios mesfilos

En este grupo se incluyen todas las bacterias, mohos y levaduras capaces de desarrollarse a 30 C en las condiciones establecidas. En este recuento se estima la microflora total sin especificar tipos de microorganismos. Refleja la calidad sanitaria de un alimento, las condiciones de manipulacin, las condiciones higinicas de la materia prima. Un recuento bajo de aerobios mesfilos no implica o no asegura la ausencia de patgenos o sus toxinas, de la misma manera un recuento elevado no significa presencia de flora patgena. Ahora bien, salvo en alimentos obtenidos por fermentacin, no son recomendables recuentos elevados. Un recuento elevado puede significar: 1 - Excesiva contaminacin de la materia prima 2 - Deficiente manipulacin durante el proceso de elaboracin 3 - La posibilidad de que existan patgenos, pues estos son mesfilos 4 - La inmediata alteracin del producto El recuento de mesfilos nos indica las condiciones de salubridad de

Conclusiones: En canales de porcino, el mtodo del hisopado recupera muy pocos microorganismos (1,88%) y las enterobacterias se detectan en el 77,5% (escisin) y 2,5% (hisopado) de las canales.
http://www.analizacalidad.com/arm2004-4.pdf

RESUMEN Se compararon dos metodologas de cuantificacin de esfilosaerobiostotales: el mtodo estndar propuesto por la Food and Drug Administration (FDA) y el mtodo de recuento en placas Petrifilm.Fueron estudiadas 25 muestras de drogas vegetales en envases individuales. Se encontraron diferencias ignificativas con un p< 0,001 entre el mtodo estndar y el mtodo de placas Petrifilm para el recuento de mesfilos aerobios, con un 95% de probabilidad. El anlisis de regresin del log10 de la media geomtrica del recuento deesfilos aerobios totales versus el log10 del recuento por placas Petrifilm, para recuentos entre 104 y 106 ,indica una correlacin de 0,964 entre ambos mtodos. Las placas Petrifilm podran considerarse como mtodo alternativo para el recuento de mesfilos aerobios totales en los controles microbiolgicos en los procesos de industrializacin de las drogas vegetales para http://www.ugr.es/~ars/abstract/41-383-00.htm http://aym.juntaex.es/NR/rdonlyres/F5A7E80C-8F6C-49DB-A4A0161A867CDC1B/0/SolicitudAnalisisMuestrasMicrobiologicas.pdf http://farmacia.ugr.es/ars/pdf/205.pdf Contaje de Placa: Consiste en el plaqueo de una muestra de volumen conocido del alimento que se analiza. El resultado es funcin de una serie de factores como son el mtodo de muestreo, el tipo de microorganismo, el tipo de alimento y las caractersticas del medio de cultivo. Los cultivos pueden hacerse tanto en masa como en superficie, aunque hay

quhttp://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/12metodos%20de%20recuento.htme considerar que los cultivos en masa son letales para la flora psicotrofa. Cada bacteria viable formar una colonia, el plaqueo puede hacerse en una placa normal o por medio de un plaqueador en espiral que va depositando concentraciones progresivamente ms diludas de la muestra.