PROCESOS FSICOS Y QUMICOS DE LA DIGESTIN PRCTICA FISIOLOGA ANIMAL.

UAX Concepto de digestin, tipos de digestin:

Digestin:

En particular la digestin qumica, se realiza por la accin de enzimas digestivas (son protenas) que catalizan la reaccin de hidrlisis: Estas enzimas son especficas de: Sustrato (ej: amilasa hidroliza el almidn, pero no la celulosa) T : existe una T ptima a la que las enzimas actan adecuadamente. Si se aumenta esta T un poco puede aumentar la velocidad de la reaccin. Sin embargo: o Valores muy altos: desnaturalizan la enzima: no se produce hidrlisis, es irreversible. o Valores muy bajos (congelacin): inhiben las enzimas, aunque si las descongelamos vuelven a recuperar su actividad pH: existe un rango fisiolgico al cual las enzimas actan fuera de l se inactivan.

Grandes partculas (Glcidos, Lpidos, Protenas)

Partculas simples (absorcin) Fsica. Qumica. Enzimas digestivas (hidrlisis)

adicin de agua a los nutrientes para dividirlos en molculas mas pequeas R- R + H2O enzimas digestivas ROH- + RH+

Hidrlisis (hidrolasas) (hidrolasas)

Especficas de

sustrato T pH

La mayora de las molculas alimenticias se pueden incluir en: Hidratos de Carbono, protenas y Lpidos.

Boca, ID, ribete en cepillo ribete en cepillo

Hidratos de Carbono

Monosacridos

Estmago (Ru), IG (no Ru) (Ru), (no Celulosa

Almidn (Polisacrido) Sacarosa Lactosa Principal fuente de Energa.

Estmago, ID, ribete en cepillo, enterocito Estmago, ID, ribete en cepillo, enterocito aas Protenas Boca, estmago, ID

Lpidos
TG

AG y monoglicridos

Emulsionados: sales biliares micelas

Objetivo de la prctica:
Examinar con diferentes pruebas laboratoriales los efectos de las enzimas digestivas sobre: Hidratos de Carbono (Amilasa salival) Protenas (Pepsina) Lpidos (Lipasa, sales biliares)

Actividad 1: Efecto de Amilasa salival sobre el almidn

AMILASA
Masticacin. Saliva: ptialina ( -amilasa).
(-1 4)

Armario de anlisis

Unidad de incubacin
Almidn Maltosa (disacrido) Polmeros pequeos (3-9 glucosas)

Lavador de tubos

Tus objetivos en este experimento son: probar los efectos de la amilasa sobre el almidn, determinar el pH ptimo al cual acta y observar los efectos de la T sobre la actividad enzimtica.
Almidn IKI

- Amilasa

Maltosa (disacrido) Benedict

Sal de cobre++ Cu++

Para determinar si existe actividad amilasa (y por lo tanto digestin qumica), utilizaremos pruebas colorimtricas cualitativas: Reactivo de IKI: es de color amarillo, pero en presencia de almidn vira a azul. Reactivo de Benedict: es de color azul pero vira de color en presencia de azcares reductores como la glucosa o la maltosa. En funcin de la cantidad de stos azcares el Benedict se tornar de verde (+) a rojo (+++). Para que oxide a los azcares, la solucin (supuesto producto de la reaccin) se debe hervir.

Glucosa, maltosa Azcar reductor

xido de cobre+ Cu+

Cul era el propsito de los tubos n1 y 2?

Qu puedes concluir de los tubos n 3 y 4?

Qu indican los tubos n 4, 6 y 7 sobre la actividad de la amilasa y el pH?

Cul es el pH ptimo para la actividad de la amilasa?

La amilasa acta a pH diferente al pH ptimo?

Cul es el producto final de la digestin del almidn?

En qu tubos detectaste la presencia de maltosa al final del experimento?

Por qu la maltosa no estuvo presente en los otros tubos?

La amilasa salival sera desactivada casi por completo en el estmago. Sugiere una razn del porqu, basada en lo que has aprendido en esta actividad?

Resultados de la Actividad 1: Tubo n 1 2 Almidn sustancias Almidn + + agua agua desionizada desionizada tampn tampn pH 7.0 pH 7.0 Condiciones 37C 37C de incubacin Prueba del reactivo IKI Prueba del reactivo de Benedict

3 Almidn + amilasa

4 Almidn + amilasa

tampn tampn pH 7.0 pH 7.0 Hervido y 37C luego incubado a 37C

5 Almidn + agua desionizada tampn pH 7.0 37C

6 Almidn + amilasa tampn pH 2.0 37C

7 Almidn + amilasa tampn pH 9.0 37C

Actividad 2: Efecto de la amilasa salival sobre la celulosa

En esta actividad investigaremos si la amilasa salival digiere o no la celulosa, que se encuentra formando parte de la pared celular de los vegetales. Tambin investigaremos si las bacterias (tales como las que se encuentran en el estmago de la vaca y otros rumiantes) digieren la celulosa y si la peptidasa (un enzima pancretica que rompe los pptidos) digerir el almidn.

Para ello utilizaremos las mismas pruebas colorimtricas que en la actividad anterior (Reactivo de IKI y Bnedict). Qu tubos mostraron un resultado positivo para el reactivo de IKI?

Qu tubos mostraron un resultado positivo para el reactivo de Benedict?

Cul fue el efecto de congelar el tubo n 1?

Cul es la diferencia entre congelar o hervir el tubo?

Cul es la subunidad mas pequea en la cual puede romperse el almidn?

Cul fue el efecto de la amilasa sobre la glucosa en el tubo n 3?

Cul fue el efecto de la amilasa sobre la celulosa en el tubo n 4?

Qu puedes concluir sobre la digestin de la celulosa a juzgar por los resultados de los tubos n 4, 5 y 7?

Cul fue el efecto de la enzima peptidasa utilizada en el tubo n 6?

Resultados de la Actividad 2: Tubo n 1 2 Amilasa sustancias Amilasa + + Almidn Almidn tampn pH 7.0 Condiciones Congelado de y luego incubacin incubado a 37C Prueba del reactivo IKI Prueba del reactivo de Benedict tampn pH 7.0 37C

3 Amilasa + glucosa tampn pH 7.0 37C

4 Amilasa + Celulosa tampn pH 7.0 37C

5 Amilasa + Celulosa

6 Peptidasa + Almidn

7 Bacterias + celulosa tampn pH 7.0 37C

tampn agua desionizada pH 7.0 37C 37C

Actividad 3: Efecto de la pepsina sobre la digestin de protenas

PEPSINA
Hidrlisis proteica en estmago a pH cido.

proteinas

pptidos

En esta actividad investigars los efectos de la pepsina sobre BAPNA una protena sinttica. Para determinar si existe actividad pepsina (y por lo tanto digestin qumica), utilizaremos como indicador pruebas colorimtricas:
pepsina

protenas (BAPNA)

pptidos

BAPNA
Benzoil L-arginina 4-nitroanilida

Protena que vira de transparente a amarillo cuando se digiere

Espectofotmetro (densidad ptica)

La protena BAPNA est en una solucin incolora y transparente. Si la protena BAPNA es digerida por la pepsina la solucin vira a amarillo. Para cuantificar la cantidad de protena BAPNA digerida utilizaremos un espectofotmetro, que es un instrumento que mide la cantidad de luz absorbida (llamada densidad ptica) por una solucin. As mediremos la intensidad del color amarillo, proporcional a la cantidad de protena BAPNA digerida (o lo que es lo mismo, de pptido formado). Cuanto mayor es la densidad ptica , mas BAPNA habr sido digerido por la pepsina.

Qu valor de pH permiti la mxima hidrlisis del BAPNA?

Qu efecto sobre la actividad enzimtica produjo el hervir el tubo de ensayo?

Qu tubos de ensayo te llevaron a esta conclusin?

La congelacin, Tendra el mismo efecto? Por qu?

Qu tubos de ensayo fueron tus controles?

Cul fue el efecto de la pepsina sobre el BAPNA?

Resultados de la Actividad 3: Tubo n 1 2 Pepsina sustancias Pepsina + + BAPNA BAPNA

3 Pepsina + agua desionizada tampn pH 2.0 37C

4 Agua desionizada + BAPNA tampn pH 2.0 37C

5 Pepsina + BAPNA

6 Pepsina + BAPNA

tampn pH 2.0 Condiciones de incubacin Densidad ptica Hervido y luego incubado a 37C

tampn pH 2.0 37C

tampn pH 7.0 37C

tampn pH 9.0 37C

Actividad 4: Efecto de la lipasa y las sales biliares sobre la digestin de lpidos

LIPASA/ SALES BILIARES
1) 2) Emulsin sales biliares Hidrlisis

Lipasa pancretica
3) 4) Formacin de micelas Absorcin

ESTMAGO

DUODENO

YEYUNO

LIPASA

ILEON
Sales biliares

TRIGLICRIDO 2

2 c.grasos libres 1 monoglicrido

Glbulo de grasa

Emulsin
1

Micelas
3

Difusin
4

Absorcin de A.B
5

En esta actividad ensayars los efectos de la lipasa y de la bilis sobre la digestin de un lpido: el aceite vegetal. La digestin del aceite vegetal por la lipasa triglicrido lipasa monoclicrido + 2AG liberar cidos grasos (AG), que disminuirn el pH de la solucin. Para determinar si existe actividad lipasa (y por Actividad enzimtica disminuye el pH (AG) lo tanto digestin qumica), utilizaremos un medidor de pH: as te ayudar a detectar la presencia de AG (y, por lo tanto, evidencia de la digestin) Medidor de pH comparando el pH del supuesto producto de la reaccin con cidos grasos, con su pH original (pH del sustrato, triglicridos).

Qu mostr el tubo n1?

Por qu el tubo n1 deba tener un pH de 7?

Cul es la principal diferencia entre los tubos n2 y 3?

Cul es el efecto de la sustancia del tubo n2 que no fue incluida en el tubo n 3?

Cul fue el pH ptimo para la digestin por la lipasa?

Cmo lo sabes?

Qu efecto tuvieron los otros tampones sobre el proceso digestivo?

Cules son los productos de digestin por la lipasa en el tubo n2?

En qu tubos detectaste la presencia de cidos grasos?

Resultados de la Actividad 4: Tubo n 1 2 Lipasa+ sustancias Lipasa+ Aceite Aceite vegetal + vegetal + Sales Sales biliares biliares tampn pH 7.0 Tampn pH 7.0

3 Lipasa+ Aceite vegetal + Agua desionizada

4 Lipasa+ Agua desionizada + Sales biliares tampn pH 7.0 37C

5 Agua desionizada+ Aceite vegetal + Sales biliares

6 Lipasa+ Aceite vegetal + Sales biliares tampn pH 2.0

7 Lipasa+ Aceite vegetal + Sales biliares tampn pH 9.0 37C

Condiciones Hervido y 37C de luego incubacin incubado a 37C pH

tampn pH 7.0 37C

37C

37C