Manual de Procedimientos Analticos Banco de Sangre Investigacin de Aglutininas frias

( Crioaglutininas)

CLAVE: EDICION: 0 15/04/2004 PAGINA 1

En algunas enfermedades pueden producirse auto- anticuerpos que tienen la caracterstica de provocar aglutinacin a muy bajas temperaturas. La prueba que se describe a continuacin permite su titulacin; ttulos de 1:32 o mayores se consideran anormales. I.- Material biolgico: Sangre tomada sin anticoagulante ( 5 mL ) Sangre con anticoagulante ( 4 mL ) Inmediatamente despues de la extraccin se colocan ambos tubos en bao mara a 37 C. II.- Reactivos: Solucin de Cloruro de Sodio al 0.85% III.- Tcnica: 1.- Una vez que la sangre sin anticoagulante se haya coagulado y se inicie la retraccin del cogulo centrifuge el tubo a 3,000 rpm durante 5 minutos y separe el suero a un tubo limpio de 13 x 100 mm por medio de una pipeta pasteur. Coloque nuevamente el tubo de suero en bao mara a 37 C. 2.- Saque del bao mara el tubo que contiene la sangre con anticoagulante y pase 1 mL de sangre a un tubo de 13 x 100 mm . lave 3 veces los eritrocitos con solucin de cloruro de sodio al 0.85 calentada a 37C. 3.- Prepare una suspensin de los eritrocitos al 5% en solucin salina calentada a 37 C ( el tubo que contiene la suspensin de eritrocitos lavados, debe ponerse en bao mara, junto con el tubo de suero, hasta terminar la prueba) 4.- En una gradilla coloque 10 o ms tubos de 10 x 75 mm, numerados progresivamente. 5.- Pipetee en cada uno de esos tubos. 0.2 mL de solucin salina al 0.85% 6.- Pipetee en el tubo # 1, . 0.2 mL de suero problema, mezcle el contenido y pase 0.2 mL al tubo # 2 y as sucesivamente hasta el tubo # 9 del cual se desechan 0.2mL, el tubo # 10 no lleva suero problema y se usa como testigo negativo, quedan as diluciones del suero 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, etc. 7.- Agrege a cada uno de los tubos, 0.2 mL de la suspensin de eritrocitos al 5% . 8.- Ponga los tubos en un vaso de precipitados de 250 mL colocado en un recipiente mayor que tenga pedazos de hielo y coloque todo en la parte inferior del refrigerador ( 4C) 9.- Una hora despus, sin centrifugacin previa, lea los tubos macroscpicamente investigando la presencia de aglutinacin. Haga despus una lectura al microscopio, poniendo una gota sobre una lmina, previamente enfriada en el refrigerador. Anote el nmero de los tubos en que la aglutinacin exista. El testigo negativo ( tubo 10 ) debe dar el resultado correspondiente; de otra manera deber repetirse la prueba.