CARLOS ALBERTO GARCIA MOGOLLN Ver 2.

Contenido
Procedimientos preliminares Fundamento
Titulo

Mtodos
Curvas patrn

Tipo de CHOs?

Mezcla de CHOs
Mtodos de separacin

CHO simple

Acondicionamiento Procedimientos NO Especficos

Especficos (Generales)

Especficos (Caracterizacin)

Qumicos Reductomtricos

Enzimticos

Instrumentales Densitometria Refractometra Polarimetra Sacarimetra

Cromatografa Electroforesis

Identificacin y cuantificacin

Azcares Reductores Complejacin

DNS

Degradacin
FCB, Lane Eynon, Munson Walker, Somogyi-Nelson, LuffSchoorl

Antrona Fenol-sulfuro

Fehling

Determinacin del titulo

Sln glucosa [conocida] = Xg de glucosa en 1000ml Sln.

Titulacin
Xg -------------- 1000ml T -------------- G

Xg. G T=------------Titulo 1000 Titulacin

Sln Muestra [desconocida] = Yg en 1000ml Sln.

G -------------- T 1000ml ------------- Y

1000. T Y=------------= g AR/L sln. G

Lane-Eynon
(AOAC Method 923.09,920.183b)

FCB
Fehling-Causse-Bonnans modificado (AOAC 1965, p. 495). En el mtodo FCB se titula con el reactivo de Fehling caliente en dos etapas, primero se aade una cantidad de reactivo de Fehling tal que se lleve a cabo la total reduccin y despus se determina el punto final con azul de metileno por goteo, es necesario un control de la temperatura y se sugieren dos titulaciones. (Pomeranz y Meloan 2000)

Solucin de glucosa o azcar invertido 0,5% 1. Titulacin

Deben gastarse alrededor de 5-6 ml de la solucin patrn para decolorar 10 ml de reactivo de FCB. Si el volumen gastado cae fuera de estos valores hay que modificar la velocidad de adicin hasta lograr el valor indicado. La velocidad de goteo encontrada como ptima ser la empleada al valorar las soluciones problema

2. Titulacin

Valoracin de Sln. muestra: Se titulan 10 ml de reactivo FCB segn el procedimiento seguido en a) pero esta vez cargando la bureta con la solucin de azcares solubles obtenida a partir de la muestra (filtrado). El gasto de esta valoracin debe estar

comprendido entre 3 y 8 ml, si no es as hay que modificar la concentracin de la solucin de azcares.

Nota 1: Es conveniente que el agregado de solucin de azcares (patrn y problema) se haga al principio a razn de 1 gota/segundo y despus del agregado de azul de metileno, a 1 gota/3 segundos. Nota 2: Se debe tener sumo cuidado en la observacin del punto final de la titulacin, pues la coloracin amarilla cambia rpidamente a parda.

Luff-Schoorl
Azcar reductor

Fenol-cido sulfrico
(4, 7-9, AOAC Method 44.1.30)

cido sulfrico

Fenol Color amarrillo-naranja Absorbance is measured at 490 nm

Under proper conditions, the phenol-sulfuric method is accurate to ~2%.

Lane- Eynon
(AOAC Method 923.09,920.183b)

Based on reduction of copper(lI} ions in alkaline solution to copper(I) ions that precipitate as the brick-red oxide CU20.

Munson-Walker
(AOAC Method 906.03)

The precipitate of cuprous oxide can be determined gravimetrically (AOAC Method 31.039, 14th ed.), bv titration with sodium thiosulfate (AOAC Method 31.040, 14th ed.), by titration with potassium permanganate (AOAC Method 31.042, l"th ed.)

SomogyiNelson

Is based on reduction of Cu2+ ions to Cu" ions by reducing sugars. The Cut ions then reduce an arsenomolybdate complex, which is prepared by reacting ammonium molybdate [(NHJ~~24] and sodium arsenate (Na2HAs07) in sulfuric acid. Reduction of the arsenomolybdate complex produces an intense, stable, blue color that is measured spectrophotometrically 520nm

Antrona-Acido Sulfrico
La reaccin de Antrona constituye la base de un mtodo conveniente para la determinacin de hexosas,

aldopentosas y cidos hexournicos,.

Tomar 2 mL de muestra y agregar 2 mL de reactivo de antrona

Agitar y tapar el tubo firmemente

Colocar en bao de agua a ebullicin durante 15 min

Colocar en bao de agua a temperatura ambiente para equilibrar la y dejar en la oscuridad

Medir la absorbancia a 620 nm despus de 20-30 min.

La solucin azul verdosa muestra una absorcin mxima

de 625 nm aunque algunos carbohidratos pueden mostrar otros colores.

DNS
cido 3,5-dinitrosaliclico

color amarillo caf

MTODO

FUNDAMENTO

PREPARACIN DE LA MUESTRA

Luff-schoorl

Los azcares reductores en presencia Se diluye la muestra, hasta que tenga de de una solucin de cobre (II), se 15-60mg de azucares reductores se oxidan y el exceso de cobre (II) se clarifica y se filtra valorar por yodometra.

Musson y Walker

Gravimetrico. El oxido cuproso se Clarificar separa por filtracin y se pesa. oxalato.

la muestra con acetato de

plomo y el exceso se precipita con

Antrona

Se determinan azucares totales. Las Se realizan diluciones de manera que se azucares forman un complejo azul obtenga una concentracin de azucares verdoso que se observa a 625nm. en el rango de 5-50ppm.

DNS

El cido 3,5-dinitrosaliclico se reduce Se realizan diluciones de manera que se a cido 3-amino-5-nitrosaliclico en obtenga una concentracin de azucares presencia de azucares reductores en el rango de 200-1000ppm

Somogyi-Nelson

Utiliza el tartrato de cobre alcalino y Secado, diluir la muestra clarificar y filtrar el yodato de potasio. El exceso de yodo se valorar por yodometra.

MTODO

CONDICIONES OPERATIVAS ml gastados

CLCULOS

Luff-Schoorl Muestra de 12-25ml

25ml del reactivo de luff almidn al 1% Na2S2O3 0.1N KI al 30%m-v H 2SO4 25ml al 25%

= Vblanco -Vmuestra

En la tabla de luff se determina los mg de azucares presentes.

Musson y Walker

Feling 50ml, muestra 50ml, ter

En las tablas de musson y walker

Antrona 2,5ml de la muestra, 200mg de antrona, Realizar curva estndar y mediante esta
100ml de H 2SO4 96% solucin estndar de determinar la concentracin de azucares glucosa

DNS 1ml de DNS, 1ml de la muestra solucin Realizar curva estndar y mediante esta
estndar 1000ppm de glucosa diluida de 200- determinar la concentracin de azucares

Somogyi-Nelson Tartatro de cobre, KIO3 almidn al 1%,

Na2S2O3 0.1N

DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES EN MIEL POR EL MTODO DE CIDO DINITROSALICLICO (DNS).

Preparacin de la muestra Miel Se peso en un beaker 50 ml en una balanza analtica y se adiciono 0.5gr de miel, luego se adiciono 40 ml de agua destilada, se tomaron 20ml de solucin y se depositaron en un matraz y se aforo hasta 250 ml con agua destilada.

Jugo Tampico Medimos 0.96 ml y 1.44 ml de jugo Tampico y adicionamos cada muestra a un matraz aforndolas con agua destilada hasta 500 ml, para reducir la concentracin hasta 400 ppm y 600ppm respectivamente. De la solucin diluida tomamos 20 ml y agregamos a cada muestra 5 ml de agente clarificante (acetato de plomo). Y posteriormente filtramos.

Datos DNS: Jugo Tampico

Muestra 1
(400ppm)

Muestra 2
(400ppm)

Muestra 3
(400ppm)

Muestra 4
(600ppm)

Muestra 5 (600ppm)

Muestra 6 (600ppm)

Muestra 7
(400ppm)

Muestra 8
(400ppm)

Muestra 9
(400ppm)

Blanco

Cantidad de jugo utilizado (ml.) Cantidad de acetato de plomo (ml.) Adicin de agua destilada (ml.) Reactivo DNS utilizado (ml.) Tiempo de ebullicin (min.) Absorbancia medida (nm.)

0.96

0.96

0.96

1.44

1.44

1.44

0.96

0.96

0.96

0.171

0.169

0.172

0.261

0.260

0.260

0.191

0.189

0.189

WALTER JOS MARTNEZ BURGOS, LUIS JAIME PEREZ CORDOBA : 2006

Clculos: DNS: Jugo Tampico Solucin estndar: Disolver 1 gr. de glucosa anhidra en 1000 ml de agua destilada, luego se realizaron las diluciones.
Tubo ml. de s/n estndar 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 ml. de agua destilada 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 Concentracin final (ppm) 0 200 400 600 800 1000 Absorbancia (575 nm) -

1 2 3 4 5 6

Clculos: DNS: Jugo Tampico

Clculos: DNS: Jugo Tampico

Clculos: DNS: Jugo Tampico

Taller de estudio