RECOLTAREA PRODUSELOR BIOLOGICE

Recoltarea produselor

adecvate, n momentul corespunztor, cu respectarea regulilor de asepsie, transportul n condiii optime i ct mai rapid spre laborator sunt absolut necesare.

Principii generale
Recoltarea probelor trebuie fcut de medic sau sub ndrumarea acestuia. Se utilizeaz numai recoltoare sterile, pe care vor fi menionate datele de identificare: numele pacientului, secia, produsul i data recoltrii,

Recoltarea produselor

Recoltarea unui produs biologic n vederea evidenierii florei microbiene trebuie efectuat, pe ct posibil, naintea administrrii tratamentului cu antibiotice. Din produsul biologic se va recolta poriunea sau fragmentul cu aspect patologic, caracteristic. Prelevarea trebuie fcut n momentul optim, n sensul posibilitii prezenei unui numr ct mai mare de microorganisme i n funcie de evoluia clinic a bolii. Cantitatea de produs trebuie s fie suficient pentru a permite efectuarea mai multor examene.

Transportul probelor

recoltate la laborator trebuie s fie fcut n timp ct mai scurt, pentru a evita modificrile cantitative i calitative ale florei, sub aciunea deshidratrii, modificrilor de temperatur, pH, etc. n probele pstrate prea mult timp, microorganismele mor datorit deshidratrii, temperaturii prea sczute sau, din contr, altele (urina) sunt medii favorabile multiplicrii excesive a florei iniiale. n cazul n care transportul poate dura mai mult timp sau nu exist posibilitatea nsmnrii imediate a probelor, se folosesc recoltoare cu medii de conservare i transport.

Exudatul faringian
Exudatul faringian se recolteaz cu tamponul steril, de unic folosin. Recoltarea se face dimineaa pe nemncate, nainte ca pacientul s se spele pe dini, s-i fac toaleta bucal sau s bea ceva. De asemenea, recoltarea se face naintea oricrui tratament cu antibiotice sau local (badijonri cu substane antiseptice, antifungice sau antibacteriene).

Exudatul faringian

Pacientul este aezat cu faa spre lumin, i se indic s deschid gura ct poate de mult i cu ajutorul unui apstor de limb se preseaz limba astfel nct s se evidenieze peretele posterior al oro-faringelui i tonsilele palatine. Se examineaz macroscopic rapid oro-faringele i cu o micare rapid, blnd dar precis se terg cu tamponul peretele faringian i tonsilele. Nu se ating peretele superior al palatului i nici limba. (Secreia lingual este o investigaie aparte, cnd se recolteaz tot cu tamponul strict de pe suprafaa limbii).

Exudatul nazal
Exudatul nazal se recolteaz n mod similar, cu tampon steril, din fiecare fos nazal. Exudatul faringian i cel nazal se transport la laborator i se nsmneaz n cel mai scurt timp posibil, evitndu-se uscarea tamponului i efectul temperaturii sczute, care duc la moartea florei bacteriene, n special a streptococilor i pneumococilor. Pentru a evita aceste neajunsuri se pot folosi tuburi cu medii de conservare i transport.

Secreiile conjunctivale, otice, secreiile de plag

Secreia conjunctival se recolteaz cu tamponul steril, dimineaa, naintea efecturii toaletei i naintea aplicrii de coliruri sau de creme oftalmice. Prelevarea se va face din sacul conjunctival intern, eventual cu tamponul umezit n ser fiziologic steril. Secreia otic se recolteaz cu tamponul steril din conductul auditiv, nainte de aplicarea oricrui tratament cu antibiotice sau antiseptice. Secreiile de plag se vor recolta cu tamponul steril, nainte de toaleta plgii. Dac plaga este profund i secreia abundent, se va recolta cu seringa steril i o prob pentru cultur n anaerobioz.

Sputa

poate fi recoltat prin expectoraie ntr-un recipient steril (gradat, de unic folosin). Pacientul este instruit ca dimineaa, dup un acces de tuse, s expectoreze n recipientul steril, evitnd s amestece sputa cu saliva. Acest lucru este dificil de realizat, principalul neajuns al metodei este c produsele sunt frecvent contaminate cu flor din cavitatea bucal. Se poate face toaleta bucal cu ser fiziologic steril. Probele de sput recoltate n cursul bronhoscopiei sunt ferite de acest inconvenient, contaminarea cu flor bucal fiind practic neglijabil. Aceast metod este cea mai recomandabil. La copiii mici, care nu tiu s expectoreze i nghit sputa, aceasta poate fi recoltat prin tubaj gastric urmat de introducerea a 10-20 ml ser fiziologic, urmat de aspiraie.

Urina

Recoltarea urinei pentru urocultur este indicat n suspiciunea de infecie urinar. Recoltarea se poate face n mai multe moduri.n majoritatea cazurilor, urina se recolteaz n timpul primei miciuni de diminea, din mijlocul jetului. Pacienii sunt instruii ca nainte de prima miciune s efectueze o toalet genital riguroas, cu ap i spun. Aceste msuri sunt absolut necesare pentru a evita contaminarea probei de urin cu flor de la nivelul mucoasei genitale. Recoltarea se face n flacoane steile, de unic folosin. Pacientul va ncepe s urineze, pentru ca prima poriune a jetului s elimine flora existent la nivelul uretrei terminale; apoi va ntrerupe voluntar miciunea; va deuruba flaconul steril i a doua parte a jetului (mijlocul jetului) o va urina direct n flacon 10 ml. Va astupa flaconul. Va termina miciunea normal, n toalet.

Urocultura

Materiile fecale

1.

se recolteaz n scopul efecturii coproculturii sau a examenului coproparazitologic. Coprocultura este indicat n bolile diareice, n febra tifoid i paratifoid i pentru depistarea portajului de enterobacterii obligat patogene. Recoltarea se face n coprorecoltoare sterile, cu mediu de conservare i transport. La bolnavii cu diaree, materiile fecale se recolteaz din scaunul emis spontan, ntr-un recipient steril, fr urme de detergeni sau dezinfectani. Cu linguria cu care este prevzut coprorecoltorul special, pacientul va recolta o cantitate mic din prob, n special cu snge sau mucus, dac exist. Proba va fi introdus n coprorecoltor, n mediul de conservare i transport Carry-Blair.

Coprocultura
2.

3.

Materiile fecale mai pot fi recoltate prin sondal rectal, cu sonda Nelaton, introdus 10-12 cm la copil i 16-18 cm la adult, i aspirnd prin presare la captul distal al sondei. Aceasta va fi apoi descrcat n ser fiziologic steril sau n mediul Carry-Blair din coprorecoltor. Pentru suspecii de portaj de enterobacterii patogene, recoltarea materiilor fecale se va face dup administrarea unui purgativ salin (sulfat de sodiu i de magneziu).

Coprocultor

Bila

Recoltarea bilei se poate face prin tubaj duodenal sau, dup colecistectomie, direct din vezica biliar cu tamponul steril sau n sering. Tubajul duodenal se efectueaz dimineaa pe nemncate, cu sonda Einhorn introdus pe nas sau pe gur, dup ce bolnavul a fcut gargar cu ser fiziologic. Se introduce sonda pn la diviziune 45, apoi se culc bolnavul pe parte dreapt i se continu introducerea sondei pn la diviziunea 60. Se aspir pe sond iniial bila A, bil amestecat cu suc duodenal. Se introduc pe sond 30 ml soluie de sulfat de magneziu sau sulfat de sodiu 40%, cu efect coleretic i colagog. Se aspir apoi bila B, de culoare verde nchis, vscoas (bila vezicular), apoi bila C, mai deschis la culoare i mai fluid (bila hepatic). Pentru examenul bacteriologic se folosete bila B, 10-20 ml.Din bila B se fectueaz culturi aerobe i anaerobe.Din eantioane de bil A, B i C se efectueaz preparate ntre lam i lamel pentru examenul parazitologic.

HEMOCULTURA

Prelevarea unei probe de snge pentru cultivarea pe medii adecvate hemocultura are indicaie n suspiciunea de bacteriemie, septicemie sau endocardit bacterian. De asemenea hemocultura este indicat n strile febrile prelungite fr o cauz decelabil. Este foarte important ca puncia venoas s fie fcut n condiii de asepsie, folosind pentru dezinfectarea pielii la locul punciei venoase compui iodai: tintur de iod sau betadin i alcool, ce vor fi lsai s acioneze pe piele minim 1 minut. Persoana care recolteaz va purta mnui sterile. Vor fi recoltate cel puin trei probe, fie ntr-un interval de 24h, n suspiciunea de endocardit, fie la intervale de timp determinate de evoluia clinic, n general n plin puseu febril, timp de 2-3 zile consecutiv. O singur prob este insuficient pentru stabilirea unui diagnostic corect, indiferent de rezultatul acesteia.

Volumul de snge indicat a se recolta pentru hemocultur este de 10 ml la adult i 1-5 ml la copii, n funcie de vrsta acestora. Sngele se recolteaz cu seringa i se descarc imediat n mediile de cultur lichide speciale. Se folosete de regul un set de dou medii de cultur: aerobe i anaerobe. Raportul optim snge: mediu de cultur este de 1: 10 (flacoanele cu medii pentru hemocultur au n general 100 ml, pentru aduli i 20 ml pentru copii ). n cazul n care pacienii au primit deja antibiotice, exist medii de cultur aerobe i anaerobe cu inhibitori de antibiotice. Totui este de preferat ca mcar primele prelevri s se fac naintea instituirii tratamentului antibacterian sau antifungic. Incubarea hemoculturilor se face la 370 C, timp de 7 zile. n sistem clasic, se fac treceri pe medii solide. Hemocultoarele automate efectueaz citiri cu ajutorul unei fotocelule ce nregistreaz modificarea turbiditii mediului prin creterea bacterian, la intervale de timp de 15-30 minute. Confirmarea pozitivrii hemoculturii precum i identificarea tulpinii izolate se face tot prin trecere pe medii de cultur solide. Dac dup 7 zile

Bact-Alert

Medii hemocultur

Vitek sistem de identificare a bacteriilor

Card identificare

Lichidul cefalorahidian (L.C.R.)

Examenul lichidului cefalorahidian este indicat n suspiciunea de meningit: febr, cefalee, fotofobie, redoarea cefei, etc. Recoltarea L.C.R. se face prin puncie lombar, n condiii de asepsie strict, dup dezinfecia pielii cu betadin sau ali compui iodai. Prelevarea se face n sering, apoi se descarc n flacoane sterile cu dop, sau/i n medii de cultur lichide pentru hemocultur. Este de preferat s existe flacoane diferite: pentru cultur, examenul biochimic i examenul microscopic. Dac nu exist dect un singur flacon, atunci mai nti se efectueaz nsmnarea (cultura), apoi examenul biochimic i cel microscopic.

La examenul macroscopic LCR normal este incolor, limpede, transparent. n meningitele bacteriene apare tulbure, glbui sau verzui. Culturile se fac pe medii solide, dar pot fi fcute i n medii lichide de hemocultur, n special la analizorul automat. Apoi, din L.C.R. se numr elementele (celulele), n camera de numrat Fuchs-Rosenthal. Valoarea normal a numrului de elemente celulare este mai mic de 5 elemente la 1 ml, acestea fiind n special limfocite. Dac numrul de celule depete limitele fiziologice, este necesar efectuarea unui frotiu colorat Giemsa pentru aprecierea raportului dintre mononucleare i polinucleare. n meningitele bacteriene, numrul de celule crete la cteva sute sau chiar mii la 1ml, predominante fiind polinuclearele. n meningitele virale, fungice i n meningita tuberculoas, numrul de elemente este mai redus i chiar dac n primele ore exist o predominen a polinuclearelor, ulterior raportul se inverseaz cu predominena mononuclearelor.

L.C.R.

L.C.R. este apoi centrifugat la 1500 g timp de 15 minute. Supernatantul este separat i va fi folosit la examenul biochimic: dozarea proteinelor, glucozei, clorurilor. Din sediment se efectueaz 2-3 frotiuri, colorate A.M., Gram i la nevoie Ziehl-Neelsen. Teste imunologice, de detectare a antigenelor bacteriene sau fungice n LCR sunt recomandate atunci cnd exist modificri semnificative ale LCR: leucocite, glucoz sczut, proteine crescute, dar pe frotiu nu se observ flor sau pacientul a fost tratat n prealabil. Pot fi detectate antigene de Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis, Haemophylus influenzae, Streptococcus agalactiae sau Cryptococcus neoformans.

Entamoeba histolytica

chist

Diagnostic
Examen

coproparazitologic repetat care evideniaz trofozoii, chiti, hematii. Examene ecografice pentru localizri extraintestinale. Detecia de antigene . PCR.

Giardia lamblia

Forma chistic

Forma vegetativ

Diagnostic
Examenul

coproparazitologic evideniaz trofozoii i chiti. Necesare repetate examene microscopice la interval de cel puin 3 zile. Se poate examina aspiratul duodenal. ELISA, imunofluorescen