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LABORATORIO DE DESARROLLO ANALITICO POTENCIA MICROBIOLOGICA

Aguilar L. Aristteles, Rosales T. Ana L., Urbina S. Jonathan U. Asesor: M. en F. Idalia L.Flores Gmez Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, UNAM, 8 semestre. Carrera de QFB. Batalla 5 de mayo s/n Esq. Fuerte de Loreto. Col. Ejrcito de Oriente, Iztapalapa, Mxico D.F.09230. arksis@hotmail.com

RESULTADOS OBJETIVOS Cuantificar la potencia de un antibitico y compararlo contra un estandar de potencia conocida por el mtodo microbiolgico por difusin en placa. De acuerdo al antibitico elegido, realizar la determinacin siguiendo un mtodo de 2+2 puntos utilizando proporciones de 1-2 (0.06-0,12 g/mL), manteniendo las condiciones de acuerdo a la FEUM. RESUMEN Se realiz mediante el mtodo de difusin en agar, la valoracin de la actividad o potencia de un antibitico (Ampicilina), observando el efecto a travs de la superficie de un medio de cultivo inoculado con un microorganismo de prueba (Micrococcus luteus), mediante los mtodos 2+2. Se prepararon diluciones de 0.12 y 0.06 mg/mL tanto del antibitico estndar como de la muestra para el mtodo. Encontrndose que la potencia del antibitico genrico en el mtodo 2+2 fue de 1508.03mg/mg, comparado con el innovador que tiene un valor de 950mg/mg. INTRODUCCION La actividad o potencia de un antibitico se demuestra por la inhibicin del crecimiento de microorganismos sensibles y especficos. En los antibiticos puede haber ligeros cambios qumicos que se traducen en la perdida de actividad antimicrobiana que no pueden demostrarse por mtodos qumicos, por esta razn, en caso de duda respecto a la actividad de un antibitico, los mtodos de valoracin microbiolgica prevalecen sobre los mtodos qumicos. Para valorar microbiolgicamente un antibitico, se pueden emplear dos mtodos: Mtodo cilindro-placa (mtodo de difusin en agar) y Mtodo turbidimetrico, ambos comparan la respuesta del microorganismo de prueba, frente a una sustancia de referencia de actividad conocida y una muestra tratada bajo las mismas condiciones. El mtodo de cilindro en placa, se basa en la difusin del antibitico desde un cilindro vertical, a travs de una superficie con agar inoculado con el microorganismo de prueba. La difusin origina zonas de inhibicin del microorganismo cuyo tamao (dimetro) esta en relacin con la concentracin del antibitico. Mtodo 2+2: E= [(S2+T2)-(S1+T1)] F= [(TI+T2)-(S1+S2)] I= log 2 F/M= E/I M= antilog F (I/E) Potencia de M

CONCENTRACIN 0.06mg/mL 0.12mg/mL

Estndar 13mm 16mm

Muestra 15mm 18mm

Anlisis de resultados
El mtodo 2+2 emplea 2 niveles de dosis tanto para la muestra como para el estndar del antibitico en estudio. La proporcin entre la dosis alta y la dosis baja es lo mismo para ambas preparaciones. Cada uno de los cuatro cilindros que contiene la caja incluye cada una de las cuatro dosis, este diseo se dice ser simtrico y balanceado. Mediante este mtodo se pueden comparar las dos lneas paralelas cada una correspondiente a la muestra o el estndar, su diferencia en potencia es revelada por la distancia vertical entre las dos lneas paralelas. Los resultados obtenidos por medio de los clculos y la grfica muestran que la potencia de la muestra genrica de ampicilina es ms potente que la estndar de patente. Cabe destacar que slo se obtuvieron cuatro halos de inhibicin, uno por cada concentracin de la muestra y el estndar, por lo que no fue posible calcular la media de las concentraciones altas y bajas; esto se puede deber a las condiciones de trabajo, preparacin de las diluciones, entre otros factores que afectan el experimento. La potencia microbiolgica de un antibitico puede disminuir por la fecha de caducidad del mismo, ya que el estndar de patente tena la fecha de caducidad ms prxima que la de la muestra genrica.

Agregar 21mL de Agar base No.11, reesterilizado a 4 cajas Petri con ayuda de una probeta de 25mL estril

Pipetear 4mL de ste Agar Semilla y agregar a las 4 cajas Petri con Agar Base y esparcir por toda la caja

Colocar 4 Penicilindros con ayuda de unas Pinzas estriles a distancias iguales (posicin 2+2)

Conclusiones
Hacer una suspensin de Micrococcus luteus agregando 3mL de Solucin Salina estril y Perlas de Vidrio
Pipetear 0.5 mL de la suspensin siembra y agregar a un matraz Erlenmeyer con 100mL de Agar no.11, a temperatura de entre 32 y 37C

Llenar los Penicilindros de dilucin de antibitico con ayuda de Jeringas de Insulina hasta observar el menisco invertido; El orden se muestra a continuacin

Se obtuvo la potencia microbiolgica de una muestra de ampicilina con respecto a un estndar por medio del mtodo del 2+2. Los halos de inhibicin son directamente proporcionales a la concentracin del antibitico.

Se evaluaron 2 muestras de ampicilina sdica obtenindose que la potencia microbiolgica de la muestra genrica fue mayor con respecto a la muestra estndar de patente.
Cuando por alguna razn la potencia de una sustancia no puede ser evaluada en trminos de sus propiedades qumicas o fisicoqumicas, como alternativa podemos considerar el ensayo microbiolgico. BIBLIOGRAFA Secretaria de Salud, Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 9 edicin, Comit Permanente de la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, 2006, p.p. 246-254 Hewitt William, Microbiological Assay for Pharmaceutical Analysis, Interpharm CRC, Washington D.C., 2004, p.p. 9-21

Agregar la suspensin de M. luteus en un matraz Erlenmeyer de 125mL

Leer en Espectrofotmetro a 580nm hasta tener 25% de Transmitancia

Incubar a 37C Y leer 2 das despus el tamao de los halos de inhibicin