ACCION DE LOS MICROORGANISMOS SOBRE DIVERSOS SUSTRATOS

DEGRADACION DE CARBOHIDRATOS La degradacin de los nutrientes: Las protenas, los lpidos y los carbohidratos son degradados mediante reacciones enzimticas que ocurren una despus de la otra. Este proceso de degradacin est dividido en tres etapas que a grandes rasgos son las siguientes: La primera consiste en la conversin de molculas complejas a molculas ms simples; esto quiere decir que una protena, que no es ms que una cadena de aminocidos, tiene que ser convertida de nuevo en sus constituyentes, que son los aminocidos, para que stos puedan ser debidamente aprovechados en la segunda etapa de degradacin. Estos procesos degradativos no requieren de energa y ocurren en el interior del microorganismo. La segunda etapa consiste en la conversin de estas molculas, ya bastante simples, en una an ms simple y comn, independientemente del origen de las molculas. Es decir, que tanto los carbohidratos como las protenas o los lpidos son convertidos en una molcula mucho ms simple llamada "acetil coenzima A". Es a partir de esta molcula que la tercera etapa del metabolismo se lleva a cabo y consiste en generar la energa que necesita la clula para realizar procesos vitales, como desplazarse o dividirse, entre otros. En esta etapa ocurre uno de los ciclos metablicos ms importantes de la biologa: el ciclo de los cidos tricarboxlicos o ciclo de Krebs. As pues, todas las molculas que sirven a un organismo como fuente de subsistencia son llevadas, por medio de diversos caminos de degradacin, a un camino metablico comn. Esta va metablica comn degrada una sola molcula en una serie de pasos y como resultado se obtiene energa principalmente en forma de ATP. Los caminos metablicos estn finamente controlados. Estos mecanismos de control consisten en que los niveles de algunos productos regulan la actividad de algunas enzimas, de tal forma que su actividad se incrementa o disminuye dependiendo de los niveles del producto. Por otra parte, las concentraciones de ATP, que como ya vimos es una molcula muy importante en el metabolismo de la clula, regulan tambin la actividad de ciertas enzimas y esto lo hacen por medio de la unin del ATP a las enzimas susceptibles de ser reguladas por esta molcula. La regulacin del metabolismo es vital, y de sta depende que un organismo produzca solamente

la cantidad necesaria de cada una de las molculas que requiere para subsistir y por lo tanto que el desperdicio de energa sea mnimo. Tanto las bacterias como las clulas de los seres superiores generan la energa necesaria durante el catabolismo y la almacenan en forma de ATP. As, stas pueden realizar funciones vitales como el movimiento, el transporte de nutrientes a su interior y la sntesis de las molculas que forman parte de su estructura o que tienen funciones especficas y deben ser sintetizadas en el interior. La sntesis de las molculas es continua e implica un recambio constante entre las molculas que se degradan y las que se sintetizan. De hecho, los procesos de degradacin se conocen, aunque las seales que los gobiernan son an tema de intensas investigaciones. El estudio del metabolismo se ha apoyado en el uso de microorganismos a los cuales se les induce un cambio gentico o mutacin. Este tipo de enfoque ha permitido entender la mayora de las vas metablicas. As, por ejemplo, el hongo Neurospora crassa puede crecer en un medio simple que contenga glucosa como nica fuente de carbono y amoniaco como fuente de nitrgeno. Sin embargo, si se expone este hongo a rayos X, se obtiene una neurospora que ya no crece en el medio simple. Esta mutante solamente puede crecer en un medio de cultivo al cual se le ha aadido el compuesto que ya no sintetiza dicho microorganismo. Un ejemplo de esto son las mutantes del hongo que ya no crecen a menos que se aada al medio un aminocido conocido como arginina (como todos los aminocidos contiene nitrgeno). Lo cual quiere decir que la sntesis de este aminocido est alterada y el hongo, por lo tanto, no puede utilizar el nitrgeno del medio para sintetizarlo. Esta mutante no crecer a menos que se le adicione dicho aminocido en el medio de cultivo. Existen toda otra serie de mutantes similares que difieren en los pasos en que el metabolismo se encuentra alterado; as se han podido conocer las diferentes etapas que forman parte de una va metablica.

I.

HIDRLISIS ACIDA Y ENZIMATICA DEL ALMIDON

Polisacridos Se necesitan ms de 10 unidades de azcar y a veces hasta miles de unidades para formar los polisacridos. El almidn es la principal reserva de energa de las hortalizas de raz y los cereales. Est formado por largas cadenas de glucosa en forma de grnulos, cuyo tamao y forma varan segn el vegetal del que forma parte.Los polisacridos sin almidn son los principales componentes de la fibra alimenticia. Entre ellos estn: la celulosa, las hemicelulosas, las pectinas y las gomas. La celulosa es el componente principal de las paredes celulares vegetales y est formada por miles de unidades. 1. Homopolisacridos Un mismo constituyente en toda la cadena. Ej. Almidn, glucgeno, celulosa, inulina. 2. Heteropolisacridos Diferentes componentes en la cadena .ej. Heparina, cido hialurnico, condroitinas.

ALMIDN Probablemente no existe otro compuesto orgnico tan ampliamente distribuidoen los vegetales como el almidn. Es el producto de asimilacin msimportant e de la fotosntesis y constituye la principal sustancia de reserva delos vegetales.Qumicamente el almidn o fcula es un polisacrido homogneo que estfor mado por una mezcla de dos polisacridos estructuralmente diferentes: amilosa y amilopectina . Amilosa Es una molcula lineal compuesta por 250 a 300 unidades de -D-glucopiranosa enlazadas por uniones 1-4. Amilopectina Es ramificada, constituida por 1.000 a 3.000 unidades de glucosa conectadas por uniones 1-4 y 1-6 en los puntos de ramificacin. El almidn se encuentra en abundancia en:- Gramneas (cereales): trigo (Triticum sativum); arroz (Oryza sativa); maz (Zea mays;); avena (Avena sativa); centeno (Secale cereale); cebada (Hordeumvulgare).Leguminosas (legumbres): porotos (Phaseolusvulgaris); arvejas (Pisumsativum); lentejas (Lens sculenta), etc.- Solanceas: papas (Solanum tuberosum). Industrialmente se le obtiene por va hmeda a partir de ellos.

Caracterstica y propiedades Se presenta como polvo blanco fino, inspido, constituido por granos caractersticos microscpicamente para cada especie. Para su caracterizacin se toma en cuenta: tamao (aprox. 2-150 u), forma, hilio o ncleo, estratificaciones; granos simples o compuestos y aspectos a la luz polarizada. El almidn es insoluble en agua fra; en agua caliente se hincha formando engrudo; se tie de azul a azul violeta con sol. R lugol; da glucosa como producto final de la hidrlisis total.

ALFA AMILASA El nombre de diastasas corresponde a un sinnimo de las amilasas, aunque se usa principalmente para designar el alfa-amilasa, que se extrae de cereales. Origen de alfa-amilasa: Fngico (Aspergillus oryzae), bacteriano (B.stearothermophilus , B. subtilis), de cereales y del pncreas. La enzima alfa-amilasa se encuentra en poca cantidad en el trigo y abunda ms en aquel que ha sido parcialmente germinado. La beta-amilasa, por el contrario, se encuentra en gran cantidad en este cereal. Acciones: Como es sabido, el almidn est formado por la fraccin amilosa de cadena recta de molculas de glucosa unidas por enlaces glucosdicos alfa1,4;en tanto que la fraccin amilopectina, adems de la cadena recta, presenta ramificaciones con enlaces glucosdicos 1,6.La alfaamilasa cataliza la hidrlisis de la cadena lineal (amilosa) y laramificada (amilopectina) d el almidn, rompiendo enlaces 1,4 interiores(endoamilasa) para formar una mezcla de dextrinas; Por ello se la conoce como enzima dextrinognica (mezcla de amilodextrina, eritrodextrina, acrodextrina y maltodextrina) con poca produccin de maltosa. Por su accin, la alfa-amilasa provee de fragmentos menores que pueden ser utilizados por la enzima beta-amilasa. La enzima alfa-amilasa requiere de un activador como, por ej., cloruro de sodio. Es sensible a una acidez elevada y se vuelve inactiva a pH 3,3 o a pH menor a 0C por 15 min. El pH ptimo de accin est dentro del rango 5-7, siendo de 6,5 para la alfa-amilasa bacteriana y pancretica. La enzima es resistente al calor, pues a 70C conserva un 70%de su actividad. Acta sobre almidones crudos y gelatinizados.

- La hidrlisis cida por accin del HCl a 100C produce una hidrlisis total del almidn y forma glucosa, maltosa, e isomaltosa.

- La hidrlisis enzimtica por accin de la enzima alfa amilasa produce una hidrlisis parcial produciendo maltosa, glucosa y dextrina lmite que es una cadena ramificada y para poder romperla se necesita de -1-6 glucosidasa.

Mtodo de fermentacin de azucares

La fermentacin es un proceso metablico de oxido-reduccin que ocurre en un medio ambiente anaerobio y, en lugar de oxgeno, un sustrato orgnico sirve como el aceptor final de hidrgeno (electrones). En los sistemas de prueba bacteriolgicos, este proceso se detecta observando cambios de color en indicadores de pH a medida que se forman productos cidos.

Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo general anaerobios facultativos. Por medio del proceso de fermentacin un hidrato de carbono es degradado y descompuesto en dos molculas de carbono (triosas) que son nuevamente degradadas en un nmero de compuestos de 1, 2, 3 y 4 carbonos. Los productos finales varan con cada especie bacteriana y depende del sistema enzimtico existente en la especie y las condiciones del medio ambiente.

El ms importante ciclo fermentativo de la degradacin de la glucosa es el ciclo de Embden - Meyerhof aun cuando ste tambin puede producirse por la derivacin de pentosa o el ciclo de Entner - Duodoroff. Pueden utilizarse diversos hidratos de carbono. La bacteria usada depende de las dificultades que se presenten para identificar un organismo determinado. Utilizando un indicador de pH con un determinado hidrato de carbono puede determinarse si una bacteria ha degradado el mismo en varios productos terminales, observando un cambio de color visible en el medio. Consistencia del medio: Lquido Inoculacin :Por difusin, inculo denso Condiciones de incubacin: Tiempo: 24 - 48 horas Temperatura : 35 a 37C

Resultados:

Medio no inoculado

negativo

Positivo

Interpretacin Positiva = Color amarillo (cido) Negativa = Color rosa - rojizo (alcalina) Color naranja

Microorganismos fermentadores de carbohidratos: Fermentadores de glucosa: Todos los miembros de las Enterobacteriaceae. Fermentadores de glucosa y lactosa:Escherichia coli, Klebsiella y grupos Enterobacter. Fermentadores de manitol: Staphylococcus aureus Fermentadores de inositol: Proteus rettgeri Fermentadores de lactosa: Neisseria lactamica Fermentadores de adonitol: Providencia alcaligenes. Fermentadores de inulina: Streptococcus salivarius y Streptococcus sanguis. Fermentadores de sacarosa: Yersinia enterocolitica. Fermentadores de salicina: Listeria monocytogenes.

II.

REACCION DE VOGUES PROSKAUER

Medio de cultivo: Medio de Clark y Lubs (caldo RM/VP)

Composicin: a) Polipeptona b) Dextrosa c) Fosfato de potasio d) Agua destilada

Fundamento

Determina la capacidad de algunos organismos de producir un producto final neutro, la acetona a partir de la fermentacin de glucosa.

La reaccin de VP se basa en la deteccin de acetona como producto final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. sta es metabolizada en cido pirvico, intermediario clave en la gluclisis. A partir del cido pirvico, una bacteria puede seguir muchas vas. La produccin de acetona (precursor de la produccin de 2,3- butanediol) que es uno de los ciclos para la degradacin de la glucosa en las bacterias. La formacin de acetona y butilenglicol es una va alternativa del metabolismo del cido pirvico. Las bacterias que utilizan esta va producen solo pequeas cantidades de cidos mixtos que son insuficientes para disminuir el pH del medio de rojo de metilo, lo bastante como para producir un cambio de color. Por este motivo muchas de las especies de Enterobacterias son VP positivas, con pocas excepciones son RM negativas y viceversa.

El primer reactivo agregado a una alcuota incubada es el catalizador alfanaftol porque ste acta como intensificador del color, lo que aumenta la sensibilidad de la reaccin sin prdida de su especificidad. El segundo reactivo es el KOH que cuando se agrega al medio de VP contribuye a la absorcin de CO2. No debe excederse de un volumen exacto. El KOH reaccionar con la peptona dando un color rosado salmn y con el agregado posterior de alfa- naftol no habr alteracin del color.

Consistencia del medio: Lquido Inoculacin: Difusin Condiciones de incubacin Tiempo: 24 horas Temperatura: 35-37 C Reactivos adicionales a) Alfa naftol al 5%, intensificador del color b) Hidrxido de potasio 40%, agente oxidante

Agregar directamente los reactivos al tubo despus de la incubacin en el siguiente orden: 1) 0.6ml de alfa naftol 2) 0.2ml de KOH 3) Agitar el tubo suavemente, dejar reposar de 10 a 15 minutos antes de la interpretacin.

Precauciones El orden de adicin de los reactivos es importante, ya que la inversin de incorporacin dar como resultado un dbil positivo o falso negativo. No debe excederse un volumen exacto de KOH ya que el exceso puede ocultar una reaccin VP dbilmente positiva. Resultados

Medio inoculado

positivo

negativo

Interpretacin Positivo: Rojo rosado en la superficie del medio (presencia de acetona). Negativo: Amarillo. Puede formarse un color cobrizo pero an as la reaccin es negativa.

III. ACCIN SOBRE LAS PROTENAS Y OTRAS SUSTANCIAS NITROGENADAS

Medio de cultivo: Medio SIM Composicin: a) Extracto de carne b) Peptona c) Hierro peptonizado (indicador de SH2) d) Tiosulfato de sodio (indicador de SH2) e) Agar f) Agua destilada g) pH = 7.3

Fundamento

Determinar si un organismo es mvil o inmvil, si es capaz de liberar cido sulfhdrico por accin enzimtica de los aminocidos que contienen azufre produciendo una reaccin visible de color negro y por ltimo la capacidad de desdoblar el indol de la molcula triptfano, adems que la consistencia del medio permite la observacin de la movilidad de algunas bacterias.

1. Produccin de hidrogeno sulfurado 2. Produccin de indol

1. Prueba de cido sulfhdrico

La protelisis de las protenas en aminocidos (aa.) individuales, algunas especies bacterianas son capaces de liberar azufre enzimticamente de los diferentes aa. Que las contienen, produciendo el gas acido sulfhdrico (SH2). La peptona, cistena y tiosulfato, todos son fuentes de azufre, pero las diferentes especies utilizan distintos compuestos o aa. Que contienen azufre para producir SH2. La enzima responsable de sta actividad es la cisteinasa.

Primera etapa La bacteria reacciona con el tiosulfato de sodio por medio de una reaccin de reduccin que da un sulfito y un sulfato. Este es un proceso de respiracin anaerbica donde el tomo de azufre sirve como aceptor de electrones para la oxidacin de los sustratos orgnicos. El tiosulfato reemplaza al sulfato como aceptor de electrones y es una fuente de azufre para el organismo. Segunda etapa El gas incoloro SH2 reacciona con una sal pesada, citrato frrico de amonio para producir un precipitado negro insoluble, sulfuro ferroso.

Bacteria (medio cido)

tiosulfato de sodio

gas SH2

SH2

iones frricos sulfuro ferroso (pp. negro)

Medios para la deteccin de H2S Agar sulfito de bismuto Agar citrato sulfuro Agar desoxicolato - citrato Medio LIA Medio TSI Agar acetato de plomo Agar S-S Agar XLD Medio SIM

AGAR TRIPLE AZUCAR HIERRO: TSI

Medio de cultivo: Agar hierro triple azcar (agar hierro de Kligler, AHK)

Composicin: f) Extracto de carne g) Extracto de levadura h) Peptona i) Proteasa j) Lactosa k) Dextrosa l) Sulfato ferroso m) Cloruro de sodio n) Tiosulfato de sodio o) Agar p) Agua destilada q) Indicador: Rojo de fenol cido: amarillo Alcalino: rojo Medio no inoculado: naranja rojizo (pH =7.4)

Fundamento Determina la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono especfico incorporado en un medio de crecimiento bsico, con produccin o no de gases, junto con la determinacin de posible cido sulfhdrico.

El agar AHK es un medio diferencial que determina tanto la fermentacin de los hidratos de carbono y la produccin de cido sulfhdrico. Las bacterias pueden utilizar cualquiera de los sustratos incorporados en el medio y ser metabolizados, caractersticas que son utilizadas para la diferenciacin de stas, principalmente para las Enterobacterias.

Este medio contiene lactosa con una concentracin de 1% y glucosa 0.1%, lo cual permite la observacin de la fermentacin de uno o de ambos carbohidratos por parte de las bacterias, adems de la produccin de gas y de cido sulfhdrico.

El medio TSI contiene una cantidad limitante de glucosa y una concentracin 10 veces mayor de lactosa. Las Enterobacterias y los fermentadores de glucosa comienzan metabolizando este azcar, ya que las enzimas que utilizan la glucosa estn presentes como constituyentes de las bacterias, y stas pueden obtener mayor energa por utilizacin del azcar ms simple.

Todos los otros carbohidratos deben ser convertidos en glucosa para entrar en el ciclo de Embden-Meyerhof. La utilizacin de la glucosa se realiza en forma aerobia sobre la estra, donde el oxgeno presente acta como aceptor terminal de electrones y en la parte terminal de la columna en condiciones de anaerobiosis. Una vez que una bacteria fermentadora de glucosa ha reducido toda la glucosa disponible a piruvato, comenzar a metabolizar el piruvato a travs del ciclo aerbico de Krebs (sobre la estra), formando productos finales cidos. El cido en el medio hace virar el amarillo del indicador de pH, rojo de fenol. Entonces, luego de6 horas de incubacin, la zona de la estra y el fondo del tubo inoculado con un fermentador de glucosa tendrn un color amarillo. Si el microorganismo no fermenta la glucosa, el fondo permanecer rojo (indicando que no hay variacin del pH) o se alcalinizar (lo que puede visualizarse por un color rojo algo ms intenso que del medio original), demostrando que la bacteria no es miembro de la familia Enterobacteriaceae.

Despus de haber agotado la cantidad limitada de glucosa, una bacteria con capacidad para utilizar la lactosa o sacarosa comenzar a degradarlas. Como el medio contiene 10 veces ms lactosa que glucosa, las bacterias encontrarn sustrato suficiente para continuar la formacin de productos finales cidos. Luego 18 24 horas de incubacin todo el medio TSI permanecer de color amarillo. Esta reaccin se denomina cido sobre cido (A/A) y el organismo se identifica como un fermentador de lactosa. La produccin de gas provocar la ruptura de la columna de agar o la empujar hacia la parte superior, de modo que un fermentador de lactosa que produce gas dar una reaccin A/A ms gas.

Si el organismo en estudio no es capaz de usar la lactosa del medio, debe producir energa en forma menos eficiente al utilizar las protenas y aminocidos del medio como fuentes nutritivas.

El metabolismo proteico se produce en la superficie de la zona inclinada donde el oxgeno es abundante. Los productos de la degradacin de la peptona (como el amoniaco) son alcalinos y provocan el viraje del indicador rojo de fenol a su color rojo original. Un TSI inoculado con una bacteria que no fermenta la lactosa al cabo de 18-24 horas de incubacin presentar la zona inclinada roja y el fondo del agar permanecer amarillo debido al metabolismo anaerobio de la glucosa durante la primera etapa. Esta reaccin se denomina alcalina sobre cido (K/A).

Las bacterias que fermentan la glucosa tambin pueden formar productos alcalinos a partir de la utilizacin de la peptona, sobre la zona inclinada. Estas reacciones sern K/K.

Consistencia del medio: Slido en pico de flauta Inoculacin: Picadura y estra en pico de flauta Condiciones de incubacin Tiempo: 18 - 24 horas Temperatura: 35 37C

Reacciones de TSI

Pico de flauta alcalino / profundidad alcalina (K/K). No fermentacin de hidratos de carbono. Caracterstico de bacterias no fermentadoras como Pseudomonas aeruginosa.

Pico de flauta alcalino / profundidad cida (K/A). Glucosa fermentada, lactosa no fermentada. Caracterstico de bacterias no fermentadoras de lactosa como especies de Shigella.

Pico de flauta alcalino / profundidad cida (negra) (K/A/H2S). Glucosa fermentada, lactosa no fermentada; produccin de H2S. Caracterstico de bacterias no fermentadoras de lactosa y productoras de H2S como: Salmonella, Arizona, Citrobacter y algunas especies de Proteus.

Pico de flauta cido / profundidad cida (A/A). Glucosa y lactosa fermentadas. Caracterstico de coliformes que fermentan lactosa como: E. coli y grupo Klebsiella- Enterobacter.

2.

Prueba de la produccin de Indol

El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos principales: indol, escatol e indolactico. Diversas enzimas intracelulares que intervienen en ste proceso reciben el nombre de triptofanasa, lo que implica el sistema completo de enzimas vinculadas con la produccin del indol. El principal intermediario en la degradacin del triptfano es el cido indol pirvico. La degradacin del triptfano libera indol, cido pirvico, amoniaco y energa. El cido pirvico puede ser nuevamente metabolizado por medio del ciclo glucoltico o entrar en el ciclo de Krebs para liberar CO2 y H2O y una gran produccin de energa. El NH3 puede ser utilizado para sintetizar nuevos aminocidos empleando la energa que se encuentra para la reaccin anablica.

La prueba de indol se bas en la formacin de un complejo de color rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehdo de p-dimetilaminobenzaldehdo (sustancia activa del reactivo de Kovacs). La formacin de indol se produce solamente en aquellos organismos capaces de fermentar los hidratos de carbono. La elevada acidez producida por la fermentacin de la glucosa puede impedir el crecimiento del organismo o inhibir la enzima. El agregado de triptfano estimula la produccin de indol mientras que la glucosa la inhibe.

Prueba de indol Reactivo de Kovacs

Adicionar 5 gotas y agitar suavemente el tubo Interpretar inmediatamente.

Conservacin: Los reactivos debern guardarse en el refrigerador (4 C) mientras no se usan, su estabilidad es variable, por lo tanto se har todas las semanas un control de calidad, desechndolos si muestran una reaccin dbil o negativa con un organismo positivo conocido.

Reporte resultados

PRUEBA Sulfuro Indol

Resultados

POSITIVO + +

NEGATIVO -

Medio sin inocular

Indol positivo

Indol negativo

Interpretacin 1. cido sulfhdrico Positivo: Ennegrecimiento del medio Negativo: Sin ennegrecimiento 2. Indol Positivo: Anillo rojo en la superficie del medio. Negativa: No se produce color Negativa: Color naranja en la superficie del medio. Indica desarrollo de escatol, un compuesto metilado que puede ser el precursor de la formacin de indol. La reaccin positiva despus de 24 horas indica una prueba completa. Si el cultivo de 24 horas es negativo deber incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba.

IV.

HIDRLISIS DE LA UREA

Medio de cultivo: Agar urea de Christensen Composicin: a) Peptona b) Cloruro de sodio c) Fosfato monopotsico c) Glucosa d) Urea e) Agar f) Agua destilada g) Indicador de pH: Rojo de fenol cido: Amarillo (pH = 6.8) Alcalino: Rojo rosado (pH = 8.4) Medio no inoculado: Amarillo (pH = 6.8) Fundamento Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando dos molculas de amoniaco por la accin de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio. La hidrlisis de la urea es catalizada por la ureasa, para dar dos molculas de amoniaco. La ureasa es una importante enzima microbiana vinculada con la descomposicin de los compuestos orgnicos.

Consistencia del medio: solido en pico de flauta Inoculacin : estra en pico de flauta Condiciones de incubacin : tiempo 18-24 horas Temperatura 35 a 37C

Resultados

Medio no inoculado

negativo

Positivo

Positivo

Interpretacin Positivo: Rojo rosado intenso en el pico de flauta Negativo: Amarillo

Reporte de resultados Positivo (+) Negativo (-)

V.

ASIMILACION DEL CITRATO

Medio de cultivo: Citrato de Simmons Composicin: a) Sulfato de magnesio b) Monofosfato de amonio c) Fosfato dipotsico d) Citrato de sodio e) Cloruro de sodio f) Agar g) Agua destilada h) Indicador de pH: Azul de bromotimol (pH= 6) Alcalino: color azul de Prusia intenso (pH = 7.6) Medio no inoculado: Color verde (pH = 6.9)

Fundamento

Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como nica fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad. El medio incluye citrato de sodio, un anin como nica fuente de carbono y fosfato de amonio como nica fuente de nitrgeno.

Citrato

Oxalacetato

+ acetato

Piruvato

CO2

Los productos obtenidos dependen del pH del medio:

del

metabolismo

del

citrato

pH bsico

Citrato pH acido 2 Piruvato

CO2

+ cido frmico + 2 cido actico acetato + CO2 + lactato

2 Piruvato

acetona

+ 2CO2

Consistencia del medio: solido inclinado (pico de flauta ) Inoculacin: Se toma una colonia bien aislada de la superficie del medio de aislamiento primario y se inocula como una estra nica en la superficie del pico de flauta. Incubacin Tiempo = 24 - 48 horas Temperatura = 35 - 37 C condensacin de en el ciclo de enzimtico sin la citritasa o citrato

Normalmente el metabolismo del citrato comprende una acetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar kre b s. El desdoblamiento del citrato comprende un sistema intervencin de la coenzima A. Esta enzima se denomina desmolasa.

Resultados

Medio no inoculado

negativo

Positivo

Positivo

Interpretacin Positivo: Crecimiento aunque no exista cambio de color. Crecimiento y el medio de color azul intenso en pico de flauta. Negativo: No se observa crecimiento y medio de color verde.

Si se utiliza carbono a partir de citrato de sodio, tambin se extrae nitrgeno del fosfato de amonio contenido en el medio, liberndose amoniaco. En ocasiones se detecta un crecimiento visible a lo largo de la lnea de siembra antes de la aparicin de color. Este crecimiento visible tambin indica resultado positivo.

BIBLIOGRAFIA Bernard D. D, Renato D., Herman N. E., 1985, Tratado de microbiologa, Tercera edicin, Salvat, Espaa, pp 201. Black J. G, 1996, Microbiology, principles and applications. Tercera edicin, Prentice Hall, USA, 790 pp. rock D. T, 1996, Microbiologa, Sexta edicin, Hispanoamericana,

Mxico, pp 100-135. Collins C. H. y Lyne M. P, 1989, Mtodos microbiolgicos, Acribia, Espaa, pp 35-56.

LINKOGRAFIA Ambron S. y Hooper K, 2002. http://dis.unal.edu.co/eidos/node47.html Beyong, 2001. http://beyond2000.com/news/Nov_00/story_901.html Carolina Miyata, 2000. http://www.idg.es/canal/ShowID.asp?ID=7119 Carolina Miyata, 1999. http://www.idg.es/canal/ShowID.asp?ID=5051

AO DE LA INTEGRACION NACIONAL Y RECONOCIMIENTO DE NUESTRA BIODIVERSIDAD UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE INGENIERA INDUSTRIAL

ESCUELA DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL

CURSO

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

TEMA

ACCION DE MICROORGANISMOS SOBRE DIVERSOS SUSTRATOS

PROFESORA

SANDRA CRUZ

ALUMNA

YASMIN CORDOVA CASTRO

PIURA - 2012