Gentica bacteriana

Resumo I - Microbiologia Tortora

Transferncia gentica e recombinao

A recombinao gentica, o rearranjo dos genes a partir de grupos separados de genes, normalmente envolve o DNA de organismos diferentes; ela contribui para a diversidade gentica. No crossing over, os genes de dois cromossomos so recombinados em um novo cromossomo, que contm alguns genes de cada cromossomo original. A transferncia gnica vertical ocorre durante a reproduo quando os genes so passados de um organismo para seus descendentes. A transferncia gnica horizontal nas bactrias envolve a transferncia de um fragmento do DNA da clula de um doador para um receptor. Quando parte do DNA do doador integrada ao DNA do receptor, a clula resultante denominada recombinante.

Transformao em bactrias
Durante o processo de transformao, os genes so transferidos de uma bactria para outra como DNA nu em soluo. Esse processo foi demonstrado pela primeira vez em Streptococcus penumoniae e ocorre naturalmente entre poucos gneros de bactrias.

Conjugao em bactrias
O processo de conjugao requer o contato entre as clulas vivas. Um tipo de clula doadora gentica F+; as clulas receptores so F-. As clulas F+ contm plasmdeos denominados fatores F; estes so transferidos para as clulas F- durante a conjugao. Quando o plasmdeo incorporado ao cromossomo, a clula denominada de Hfr (alta frequncia de recombinao) Durante a conjugao, uma clula Hfr pode transferir o DNA cromossmico para uma clula F-. Normalmente, o cromossomo Hfr se rompe antes de ser transferido completamente.

Transduo em bactrias
No processo de transduo, o DNA passado de uma bactria para outra em um bacterifago e ento incorporado ao DNA do receptor. Na transduo generalizada, quaisquer genes bacterianos podem ser transferidos.

Plasmdeos e transposons
Os plasmdeos so molculas de DNA auto-replicantes circulares, transportando genes que geralmente no so essenciais para a sobrevivncia da clula. Existem vrios tipos de plasmdeos, incluindo plasmdeos conjugativos, plasmdeos de dissimilao, plasmdeos que transportam genes para toxinas ou bacteriocinas e fatores de resistncia. Os transposons so pequenos segmentos de DNA que podem se mover de uma regio para outra do mesmo cromossomo, ou para um cromossomo diferente ou para um plasmdeo. Os transposons so encontrados nos principais cromossomos do organismo, em plasmdeos e no material gentico dos vrus. Eles variam de simples (sequncias de insero) a complexos (contendo genes alm dos envolvidos com a replicao do prprio transposon) Os transposons complexos podem transportar qualquer tipo de gene, incluindo genes de resistncia a antibiticos, e assim, so um mecanismo natural para mover genes de um cromossomo para outro. Genes e evoluo A diversidade pr-condio para a evoluo. A mutao e a recombinao gentica fornecem uma diversidade de organismos, e o processo de seleo natural permite o crescimento daqueles mais bem adaptados a um dado ambiente. Pr-requisitos gerais

Estrutura e funo do material gentico

Gentica o estudo do que so os genes, como eles transportam informao, como sua informao expressa e como eles so replicados e passados s geraes subsequentes ou a outros organismos. O DNA nas clulas existe como uma hlice de fita dupla; as duplas fitas so mantidas juntas por pontes de hidrognio entre pares de bases nitrogenadas especficas: AT e CG. Um gene um segmento de DNA, uma sequncia de nucleotdeos que codifica um produto funcional, geralmente uma protena. Quando um gene expresso, o DNA transcrito para produzir RNA; o mRNA ento traduzido em protenas. O DNA em uma clula duplicado antes da diviso celular; assim, cada clula filha recebe a mesma informao gentica.

Gentipo e fentipo
O gentipo a composio gentica de um organismo, seu complemento integral de DNA. O fentipo a expresso dos genes: as protenas da clula e as propriedades que elas conferem ao organismo.

DNA e cromossomos
O DNA em um cromossomo existe como uma dupla hlice longa, associada a vrias protenas que regulam a atividade gentica. O DNA bacteriano circular; o cromossomo da E.coli, por exemplo, contm cerca de 4 milhes de pares de base e aproximadamente mil vezes mais longo que a clula. Genmica a caracterizao molecular dos genomas. A informao contida no DNA transcrita em RNA e traduzida em protenas.

Replicao do DNA
Durante a replicao do DNA, as duas fitas da dupla hlice se separam na forquilha de replicao, e cada fita usada como um molde pela DNA polimerases para sintetizar duas fitas novas de DNA de acordo com a regra do pareamento de bases nitrogenadas. Da replicao do DNA resultam duas novas fitas de DNA, cada qual tendo uma sequncia de bases complementar a uma das fitas originais. Como cada molcula de DNA de fita dupla contm uma fita original e uma fita nova, o processo de replicao denominado semi-conservativo. O DNA sintetizado em uma direo designada 5'-3'. Na forquilha de replicao, a fita lder sintetizada continuamente, e a fita complementar, descontinuamente. A DNA polimerase verifica as novas molculas de DNA e remove as bases erradas antes de continuar a sntese do DNA. Cada bactria filha recebe um cromossomo que virtualmente idntico ao da me.

RNA e sntese proteica

Durante a transcrio, a enzima RNA polimerase sintetiza uma fita de RNA a partir de uma das fitas do DNA de fita dupla, que serve como molde. O RNA sintetizado a partir de nucleotdeos contendo as bases A, C, G e U, que fazem par com as bases de fita de DNA a ser transcrita. O ponto de incio da transcrio, onde a RNA polimerase se liga ao DNA, o stio promotor; a regio do DNA que o ponto de encerramento da transcrio o stio terminador; o RNA sintetizado na direo 5'-3'. Traduo o processo em que a informao na sequncia de bases de nucleotdeos do mRNA usada para ditar a sequncia de aminocidos de uma protena. O mRNA se associa aos ribossomos, que consistem de rRNA e protena. Os segmentos de trs bases de mRNA que especificam os aminocidos so denominados cdons. O cdigo gentico refere-se s relaes entre a sequncia de bases dos nucleotdeos do DNA, os cdons correspondentes do mRNA e os aminocidos que os cdons codificam. O cdigo gentico degenerado; isto , a maioria dos aminocidos codifica por mais de um cdon. Dos 64 cdons, 61 so cdons senso (que codificam aminocidos) e 3 so cdons anti-senso (que no codificam aminocidos e so sinais de interrupo de traduo). O cdon de iniciao (start), AUG, codifica a metionina. Aminocidos especficos esto aderidos a molculas de tRNA. Outra poro do tRNA tem um triplet de bases denominado anti-cdon.

 O pareamento de bases dos cdons e anticdons no ribossomo resulta na captao de aminocidos especficos para o local de sntese proteica. O ribossomo se move ao longo da fita de mRNA medida que os aminocidos so unidos para formar um polipeptdeo em crescimento; o mRNA lido na direo 5'-3'. A traduo termina quando o ribossomo atinge um cdon de parada (stop) no mRNA. Em procariotos, a traduo pode comear antes que a transcrio esteja completa.

A regulao da expresso gnica bacteriana

A regulao da sntese proteica no nvel gentico eficiente em termos de energia, pois as protenas so sintetizadas somente quando necessrio. As enzimas constitutivas fazem produtos em uma velocidade fixa. Exemplos so os genes para as enzimas da gliclise. Para esses mecanismos reguladores genticos, o controle dirigido sntese do mRNA.

Represso e induo
A represso controla a sntese de uma ou vrias enzimas (repressveis) Quando as clulas so expostas a um produto final especfico, a sntese das enzimas relacionadas quele produto diminui. Na presena de certas substncias qumicas (indutores), as clulas sintetizam mais enzimas. Esse processo denominado induo. Um exemplo de induo a produo de beta-galactosidase pela E.coli na presena de lactose; assim, a lactose pode ser metabolizada.

O modelo Operon da expresso gnica

A formao de enzimas determinada por genes estruturais. Nas bactrias, um grupo de genes estruturais regulados coordenadamente com funes metablicas relacionadas, alm dos stios promotor e operador que controlam sua transcrio, so todos denominados operon. No modelo de operon para um sistema indutvel, um gene regulador codifica a protena repressora. Quando o indutor est ausente, o repressor liga-se ao operador, e nenhum mRNA sintetizado. Quando o indutor est presente, liga-se ao repressor, de modo que ele no pode se ligar ao stio operador; portanto, o co-repressor controla a sntese da enzima. A transcrio de genes estruturais para enzimas catablicas (como a beta-galactosidase) induzida pela ausncia de glicose. O AMP e o PRC cclicos devem se ligar a um promotor na presena de um carboidrato alternativo. A presena de glicose inibe o metabolismo das fontes de carboidrato alternativas por represso catablica.

Mutao: alterao no material gentico

A mutao uma alterao na sequncia de bases nitrogenadas do DNA; essa alterao modifica o produto codificado pelo gene mutado.

Tipos de mutaes

Muitas mutaes so neutras, algumas so desvantajosas e outras so benficas. Uma substituio de base ocorre quando um par de bases no DNA substitudo por um par diferente. Alteraes no DNA podem resultar em mutaes non-sense (que causam substituies de aminocidos) ou anti-senso (que criam um cdon de parada). Em uma mutao de troca de fase de leitura (frameshift), um ou poucos pares de bases so deletados ou adicionados ao DNA. Os mutagnicos so agentes ambientais que causam alteraes permanentes no DNA. As mutaes espontneas ocorrem sem a presena de um mutagnico.

Mutagnicos
Os mutagnicos qumicos incluem os mutagnicos de pares de bases (e.g., cido nitroso), anlogos de nucleotdeo (e.g., 2-aminopurina e 5-bromouracil) e mutagnicos de troca de fase de leitura (e.g., benzopireno) A radiao ionizante causa a formao de ons e radicais livres que reagem com o DNA; isso resulta em substituies de base ou rompimento do esqueleto de acar-fosfato. A radiao ultravioleta (UV) no ionizante; ela causa ligaes entre as timinas adjacentes. O dano ao DNA causado pela radiao UV pode ser reparado por enzimas que clivam e substituem a poro lesada do DNA. As enzimas de reparo em presena de luz reparam os dmeros de timina na presena de luz visvel.

A frequncia de mutao
A taxa de mutao a probabilidade de que um gene ir mutar quando uma clula se dividir; a taxa expressa como 10 em uma potncia negativa. As mutaes normalmente ocorrem aleatoriamente ao longo de um cromossomo. Uma taxa pequena de mutaes espontneas benfica, fornecendo a diversidade gentica necessria para a evoluo.

Identificando mutantes
Os mutantes podem ser detectados por meio de seleo ou testes para um fentipo alterado. A seleo positiva envolve a seleo de clulas mutantes e a rejeio de clulas nomutadas. A placa rplica usada para a seleo negativa para detectar, por exemplo, auxotrficos que possuem necessidades nutricionais que a clula parental no possui.

Identificando carcingenos qumicos

O teste de Ames um exame relativamente barato e rpido para identificar possveis carcingenos qumicos. O teste presume que uma clula mutante pode reverter para uma clula normal em presena de um mutagnico e que muitos mutagnicos so carcingenos. Os auxotrficos para histidina de Salmonella so expostos a um carcingeno potencial

tratado enzimaticamente, e reverses para o estado no-mutante so selecionadas.