6.

Determinacin de parmetros del sistema biolgico

Parmetros biolgicos involucrados en el diseo de fermentadores:

1. Parmetros independientes de la mecnica de fluidos:

1. Parmetros dependientes de la mecnica de fluidos:

Coeficientes de velocidad biolgica: k1, k2, k3 Coeficientes de productividad: S0K0, etc. Densidad microbiana hmeda y seca: 0, d, w

Tamao de flculo: Vp/Ap Espesor de pelcula microbiolgica: L

6.1. Coeficientes de velocidad y productividad

La ecuacin de velocidad biolgica es de naturaleza general, por lo que puede ser aplicada tanto a flculos como a pelculas microbianas, una vez determinados los coeficientes de velocidad biolgica (k1, k2, k3) mediante experimentos que involucran cualquiera de estas geometras

6.1. Coeficientes de velocidad y productividad

Principal dificultad experimental para la determinacin de los coeficientes de velocidad biolgica Medicin de la dimensin caracterstica apropiada, L para pelculas y Vp/Ap para flculos

6.1. Coeficientes de velocidad y productividad

6.1.1. Sistemas con flculos microbianos
6.1.1.1. Procesos intermitentes
Coeficientes de velocidad biolgica Coeficientes de productividad

6.1.1.2. Procesos continuos

Coeficientes

de velocidad biolgica Coeficientes de productividad

6.1.1.1. Procesos intermitentes

Coeficientes de velocidad biolgica:

Experimento con un fermentador intermitente completamente mezclado Las cocentraciones de microorganismos, sustrato y producto se monitorean durante cierto perodo de tiempo, obtenindose la curva de crecimiento caracterstica

Fig. 1. Curva de crecimiento

Ci
Concentracin de masa microbiana

Mi

Concentracin de sustrato

t=0

Tiempo

Coeficientes de velocidad en procesos intermitentes:

En reacciones aerbicas, la mejor forma de monitorear el experimento es mediante el consumo de oxgeno, usando el aparato de Warburg o algn respirmetro automtico Las concentraciones de microorganismos pueden determinarse mediante medidas de turbidez con una curva de calibracin adecuada

Coeficientes de velocidad en procesos intermitentes:

Haciendo un balance de la masa microbiana sobre el incremento de tiempo, t, durante la fase de crecimiento: M(t+t) - M(t) = S0K0 RMt (1)

Coeficientes de velocidad en procesos intermitentes:

Donde:
M(t) masa de microorganismos por unidad de volumen del fermentador al tiempo t R velocidad de remocin de sustrato por unidad de masa de microorganismos (incluye resistencia difusional de fase lquida) S0K0 coeficiente de productividad

Coeficientes de velocidad en procesos intermitentes:

Considerando los lmites, la ec. (1) conduce a: 1 dM = S0K0 R M dt o ln M2 = S0K0 R (t2 t1) M1 (3) (2)

Coeficientes de velocidad en procesos intermitentes:

La ecuacin (2) requiere la determinacin experimental de la dimensin caracterstica (Vp/Ap) Dicho parmetro puede:
a) b)

Variar durante el curso del experimento y Exhibir una distribucin a cualquier tiempo

Esta dificultad se resuelve con una agitacin vigorosa de modo que el tamao de partcula sea suficientemente pequeo

Coeficientes de velocidad en procesos intermitentes:

Bajo las condiciones antes descritas la ecuacin (2) se reduce a: 1 dM = S0K0 k1C = Gmax M dt 0(1+k3C) k3C (4)

1 + k3C

Coeficientes de velocidad en procesos intermitentes:

Los resultados experimentales pueden expresarse grficamente en trminos de = f(C*), donde: = 1 dM M dt (5)

Combinando las ecs. (4) y (5) (Wilkinson, 1961): = Gmax k3C (6) 1 + k3C

Fig. 2. Mtodo para la obtencin aproximada de valores de k1 y k3

max

max 2

Ecuacin (6)

max = Gmax = S0K0k1 k30

Resultados Experimentales tpicos

C. = 1/k3

C*

Limitaciones de los datos de fermentador intermitente

Determinacin de k2, pues sta requiere de un conocimiento experimental detallado de la distribucin de tamao de partcula. Acumulacin de productos durante el perodo de tiempo del experimento. Variacin de coeficientes de productividad y cambios en las caractersticas bioqumicas de los m.o. a lo largo de la curva de crecimiento.

Relacin entre tiempo de duplicacin y parmetros del sistema biolgico Tiempo de duplicacin (td) = tiempo requerido para duplicar la masa de determinada cepa de microorganismos td = ln 2 S0K0R = ln 2 G (7)

Relacin entre tiempo de duplicacin y parmetros del sistema biolgico A concentraciones suficientemente altas del sustrato limitante: td = k3 0 ln 2 k1 S0K0 = ln 2 Gmax (8)

Coeficientes de productividad
La variacin de la concentracin de m.o. con el tiempo en un proceso intermitente est dado por la ecuacin (2), de manera anloga: Para la concentracin de sustrato:

dC = - R M dt

(9)

Para la concentracin de producto:

dP = SpKp R M dt

(10)

Coeficientes de productividad
La razn de las ecuaciones (2), (9) y (10) conduce a los coeficientes de productividad:

S0K0 = - dM dC dt SpKp = - dP dC dt dt dt

(11)

(12)

Fig. 3. Determinacin de coeficientes de productividad

M Mi o P - P i
Pendiente = -S0K0

Pendiente =SpKp

Ci - C

6.1.1.1. Procesos continuos

La operacin de un fermentador continuo de tanque agitado (FCTA) tiene la ventaja de proporcionar un ambiente constante para los microorganismos La concentracin de sustrato (C), microorganismos (M) y productos bioqumicos (P) son independientes del tiempo

6.1.1.1. Procesos continuos

Coeficientes de velocidad biolgica:
Haciendo un balance de masa total para los microorganismos:

S0K0 R M V = F M
Donde: F V R

(13)

Velocidad de flujo volumtrico Volumen del lquido en el fermentador Velocidad de remocin de sustrato por unidad de masa de los microorganismos

Coeficientes de velocidad en procesos continuos

Cuando el tamao del flculo microbiano es suficientemente pequeo:

C =

k1 - k3

-1

(14)

V S0K0 0

S0K0 V

Coeficientes de velocidad en procesos continuos

Para un sistema de crecimiento asociado simple, la concentracin de producto y microorganismos estn relacionadas a la ecuacin (14):

M = S0K0 (Ci C) P = Pi + SpKp (Ci C)

(15) (16)

Fig. 4. Concentracin en un fermentador continuo de tanque agitado

M

P
ad d ivi t uc d ro P

C Pi

Ci
Arrastre

F/V

Coeficientes de velocidad en procesos continuos

La ecuacin (14) se puede rearreglar:

1 = Gmax k3 V k3 C Donde: Gmax = SpKp k1 k3 0 F

(17)

(18)

Fig. 5. Determinacin de coeficientes de la ecuacin (19)

1/C
Pendiente = Gmax k3

k3

Arrastre

Resultados Experimentales tpicos

V/F

Coeficientes de velocidad en procesos continuos

Problema:
Se requieren velocidades de flujo muy pequeas para no exceder el arrastre (wash out) En sistemas anaerbicos el problema se acenta por las velocidades de crecimiento relativamente bajas

Coeficientes de velocidad en Procesos continuos

Cuando hay arrastre, la concentracin de sustrato en el fermentador C = Ci, de modo que la velocidad de flujo en el arrastre (Fw/o), partiendo de la ec. (14), est dada por:

Fw/o =

S0K0 k1 Ci 0 (1 + k3 Ci)

(19)

Coeficientes de velocidad en Procesos continuos

O bien:

Fw/o = V S0K0 Rmax

k3 Ci 1 + k3 Ci

(20)

Donde:
Rmax Velocidad mxima de consumo de sustrato = k1/0 k3

Coeficientes de productividad
La fermentacin continua conduce a coeficientes de productividad pseudoiniciales Los datos experimentales en la forma indicada en la fig. 4, junto con las ecuaciones (15) y (16), proporcionan los coeficientes de productividad

Coeficientes de productividad
Valores de coeficientes de productividad obtenidos en fermentacin continua son un poco ms constantes para todos los sistemas que aquellos obtenidos en fermentacin intermitente Valores obtenidos en fermentacin intermitente son mayores que aquellos alcanzados en fermentacin continua

6.2. Densidad microbiana

Densidad hmeda (w)
El peso hmedo de un flculo microbiano incluye:

El agua absorbida en la superficie del flculo El agua contenida en el gel El agua qumicamente atada

Densidad hmeda (w)

Aiba y col. (1964) propusieron un mtodo para la determinacin de la densidad hmeda, que involucra la medicin de:

La densidad de la suspensin microbiana (s) La densidad del medio lquido (m) El volumen hmedo de las clulas (Vc) en un volumen total de suspensin Vs

Densidad hmeda (w)

Haciendo un balance de masa:

w = Vs s - (Vs - Vc) m Vc

(21)

Densidad hmeda (w)

Las densidades (m y s) se determinan con picnmetro El volumen celular (Vc) se obtiene por centrifugacin Otro mtodo consiste en suspender los flculos en un medio lquido y equilibrar las densidades de los flculos y el medio ajustando la concentracin del medio

Densidad seca (d)

Schroepfer y col. (1955) desarrollaron un procedimiento simple para la determinacin de densidades microbianas secas mediante el uso de un aparato de volumen constante como un picnmetro El peso del picnmetro se determina cuando contiene medio libre de clulas y una cantidad de microorganismos en el mismo medio

Densidad seca (d)

El peso seco de los microorganismos (Wd) se obtiene por filtracin y evaporacin Haciendo un balance de masa:
Cambio en Volumen de Cambio en densidad

peso del = clulas secas picnmetro adicionadas

del volumen lquido desplazado

Densidad seca (d)

Esto es: W = Wd (d m) d O bien: d = m 1 - W/Wd (22)

(23)

6.3. Tamao de flculo

El tamao de flculo caracterstico de inters en el diseo de fermentadores es la razn entre el volumen hmedo y el rea superficial hmeda del flculo Complicacin en un tanque agitado existe una distribucin de tamao de flculo

6.3. Tamao de flculo

La media de dicha distribucin vara con la intensidad de la agitacin y la temperatura En los procesos intermitentes puede ocurrir un incremento en el tamao medio del flculo durante el perodo de fermentacin

6.3. Tamao de flculo

En la ecuacin de velocidad biolgica:
R = g (Vp/Ap , C*) g1 (Vp/Ap ) x g2 (C*)

Estrictamentamente, Vp/Ap puede ser slo determinado a partir de la cintica Pueden determinarse aproximaciones combinando procedimientos fsicos y fotogrficos

6.3. Tamao de flculo

1. Tamao de partcula medio basado en una partcula esfrica 2. Tamao de partcula medio basado en una partcula irregular 3. Tamao de partcula efectivo basado en cintica

I. Tamao de flculo basado en partcula esfrica

Relacin del volumen hmedo de un flculo con la densidad hmeda y seca: Vp w = Vd d + (Vp Vd) m
O bien,

(24) (25) w - m

Vp = d - m Vd

I. Tamao de flculo basado en partcula esfrica

El volumen seco medio de un flculo d est relacionado con el peso seco de una cantidad de microorganismos por:

-) (V

d n

Vd =

Wd

(26)

Donde: n nmero de flculos

I. Tamao de flculo basado en partcula esfrica

Sustituyendo la ec. (26) en la (25):

Vp = d - m

Wd w

d n

(27) -

I. Tamao de flculo basado en partcula esfrica

Suponiendo que el flculo tiene forma esfrica:

dp = 6

1/3

(Vp) 1/3

(28)

Donde: dp tamao medio del flculo

I. Tamao de flculo basado en partcula esfrica

Combinando las ecuaciones (27) y (28):

Ap

V =
p

dp = 6-2/3 -1/3 d - m w - m

1/3

Wd

1/3

(29)

d n

II. Tamao de flculo basado en partcula irregular

Se puede obtener una aproximacin del rea superficial de un flculo microbiano mediante microfotografa Puede asumirse que el flculo cambia slo de forma, pero conserva su volumen y rea superficial

II. Tamao de flculo basado en partcula irregular

El rea puede calcularse con la siguiente ecuacin: Ap = 2A + P Vp A Donde:
A P

(30)

rea proyectada de un flculo hmedo permetro de un flculo hmedo

III. Tamao de flculo basado en cintica

El tamao de partcula es un parmetro fsico determinado experimentalmente Es posible usar la ecuacin de velocidad biolgica para flculos con un experimento cintico en un fermentador continuo o intermitente, para determinar el tamao de partcula efectivo.

III. Tamao de flculo basado en cintica

A partir de las ecuaciones (13) y (15) para un FCTA:

R = F Ci C0 V M0

(30)

Donde: R valor medio de R

III. Tamao de flculo basado en cintica

A concentraciones bajas de sustrato y sin limitante difusional en la fase lquida: R = tanh k3C0) k1 C0
R

(31) 0(1 +

III. Tamao de flculo basado en cintica

Donde:
R

k2 Vp

(31)

Ap(1 + 2k3C0)1/2 Por tanto: R=g Vp Ap e , C* (32)

III. Tamao de flculo basado en cintica

Aunque se sabe que el volumen y el rea de partcula incrementan en un fermentacin intermitente, existe evidencia que sugiere que su razn permanece constante (Mueller y col., 1966)

6.4. Espesor de pelcula

Producto

Sustrato

La determinacin del espesor de pelcula bajo condiciones aspticas en un fermentador de lecho fluidizado, es fcilmente lograda operando el fermentador con altas concentraciones de sustrato

6.4. Espesor de pelcula

Bajo dichas condiciones: Q (Ci C0) = k1 L As Z k3
(33)

6.4. Espesor de pelcula

Atkinson y Daoud (1970) desarrollaron un mtodo para determinar el espesor de una pelcula microbiolgica delgada en un reactor Kornegay y Andrews (1968) determinaron directamente el espesor de la pelcula mediante procedimientos pticos