2010 A PROBLEMARIO DE CROMATOGRAFA

UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA
CENTRO UNIVERSITARIO DE CIENCIAS EXACTAS E INGENIERIAS DEPARTAMENTO DE QUIMICA

PROBLEMARIO DE CROMATOGRAFIA

ELABORADO POR LOS PROFESORES: RAQUEL TREVIO ORTIZ. MARIA TERESA GARCIA MARTINEZ. BERNARDO GUDIO GUZMAN ELEAZAR DELGADO CHAVEZ ROSALIA PALACIOS JUAREZ.

FEBRERO 2010

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I.CROMATOGRAFA PLANAR
Problema 1. Se coloca una mezcla de los compuestos 1 al 6 formando una mancha a 2.0 cm a la derecha y 2.0 cm por encima del borde inferior izquierdo de una placa para cromatografa de capa fina. Se permite que el Cromatograma se desarrolle en el disolvente A, hasta que el frente del disolvente llega a una distancia de 12.0 cm del borde inferior de la placa. Despus de esta operacin se observan 2 manchas, una a 4.5 y la otra a 10 cm del borde inferior de la placa. Tras dejar secar la placa se gira 90 en sentido contrario a las manecillas del reloj y se corre el Cromatograma en el disolvente B hasta que el frente del disolvente se encuentre a 12 cm del borde sumergido de la placa. La primer mancha de izquierda a derecha se separa en 4 manchas: a 2.7, 5.1, 6.5 y 9.9 cm del borde inferior; la segunda mancha se separo en dos, a los 4.7 y 10.6 cm del borde inferior. Dibuje la apariencia de la placa (a escala aproximada) despus de la primera etapa y despus de la segunda etapa de la separacin, y calcule los valores de Rf de cada mancha en cada etapa.
Solvente A Solvente B

90

Problema 2. Una mezcla de dos compuestos (A y B) migra desde el origen, generando dos manchas con las siguientes caractersticas (distancia de migracin desde el origen x y dimetro de la mancha w). xA = 49 mm wA = 2.0 mm xB = 33 mm wB = 2.5 mm El frente de la fase mvil fue de 61 mm, desde el inicio. Clcule los valores de Rf para los compuestos A y B. Problema 3. Una mezcla de dos compuestos (A y B) migra desde el origen, generando dos manchas con las siguientes caractersticas (distancia de migracin x y dimetro de la mancha w). xA = 27 mm xB = 33 mm wA = 2.0 mm wB = 2.5 mm

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El frente de la fase mvil fue de 60 mm, desde el inicio. a) Calcule el factor de retardo Rf, la eficiencia N, y la altura equivalente de un plato terico HETP para cada compuesto. b) Calcule la resolucin entre los compuestos A y B c) Establezca la relacin entre el factor de selectividad y el Rf de los dos compuestos. Calcule su valor numrico. Problema 4. La siguiente figura representa los resultados de una placa de CCF en fase normal (fase mvil: hexano:acetona, 80:20). Los compuestos tienen las estructuras A, B, y C.

a.Indique en el registro, a cuales picos corresponden los compuestos A, B, y C. b.Cul debera ser el orden de elucin de estos compuestos si se examinaran por columna de HPLC utilizando los mismos tipos de fases mvil y estacionaria? c.Cul debera ser el orden de elucin de estos compuestos si se examinaran por columna de HPLC conteniendo una fase de tipo RP-18, con una mezcla binaria de acetonitrilo:metanol (80:20) como eluente? d.Calcule Rf y HETP para el compuesto que migra mas rpidamente sobre la placa

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II. EVALUACIN DE PARMETROS CROMATOGRFICOS. Problema 5. Para conocer la presencia de trimetoprima y sulfametoxazol en diferentes productos farmacuticos se emplea la tcnica de capa fina. Se utiliza una Cromatoplaca de slica gel con indicador. Como fase mvil Mezcla de cloroformometanol- hidrxido de amonio. Despus de realizar el tratamiento adecuado a las muestras y estndares e identificarlos como: Columna Solucion A Solucion B 1 2 3 4
Contenido STD Trimetoprima STD Sulfametoxazol Pfizer Collins PiSA Liferpal

se aplic a la placa de gel de slice cromatogrfica, 10 l de las soluciones A y B de la preparacin de referencia y 10 l de la preparacin de la muestra. Se dej correr la fase mvil hasta 12 cm arriba de la lnea de aplicacin. Al retirar la cromatoplaca de la cmara, se marc el frente de la fase mvil, se sec con aire seco, localizando las bandas por observacin bajo luz ultravioleta de onda corta, rociando con la solucin reveladora y obtuvimos lo siguiente:

a) Determinar la identidad de trimetoprima y Sulfametozaxol en cada producto segn su Rf. b) Identificar los compuestos relacionados de cada producto: NOTA: Cualquier mancha obtenida con la preparacin de la muestra diferente de la mancha principal, con valores Rf de aproximadamente de 0.6 a 0.7, corresponderan a las impurezas de Sulfametoxazol. De 0.8 a 0.9 a las impurezas de trimetoprima y las que sean inferiores a 0.5 se consideran excipientes. c) De acuerdo a lo obtenido segn criterios de a) y b), cual sera el mejor producto(*)? (Collins) Problema 6. Con un CG y una columna de relleno de 40 cm se obtuvieron los siguientes datos: Compuesto Aire Metilciclohexano Metilciclohexeno Tolueno tR [min] 1.9 10.0 10.9 13.4 W1/2 [min] 0.76 0.82 1.06

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Cacular: a) el nmero de platos tericos promedio b) La altura del plato promedio para la columna. Problema 7. En una columna de 122 cm de longitud y a una temperatura de 160C se obtuvieron los siguientes tiempos de retencin en minutos: pico del aire 0.90, heptano 1.22 y octano 1.43. El ancho en la base de los picos fue de 0.14 min para el heptano y de 0.20 min para el octano. a) Calcular la retencin relativa y la resolucin para estos picos. b)Qu longitud debera tener la columna para obtener una resolucin de 1.5? Problema 8. Considerando una columna con una altura de plato de 1.5 mm y con nmero de platos de 333, por la que fluye el gas portador a un caudal de 3 mlmin-1, y sabiendo que el volumen muerto es de 1.0 ml: a.- Cules son el tiempo de retencin y el volumen de retencin cuando k es 1, 2 ,5 y 10? b.- Cul sera la anchura en la base de los picos a cada uno de los valores anteriores de k? Problema 9. Calcular a) el factor de capacidad o de retencin k, y b) la resolucin Rs, de los siguientes analitos en un sistema cromatogrfico por HPLC, con los datos que figuran en la siguiente tabla: Analito tr, w, min s propoxur 1.72 29 carbaryl 5.52 39 1-naftol 7.34 30 methiocarb 7.70 65 to= 1.12 min c) Indicar si los picos cromatogrficos de los componentes de la muestra estn bien resueltos; d) calcular el nmero de platos tericos efectivos para el 1-naftol. Problema 10. En un cromatograma, los tiempos de retencin de los picos A, B y C, donde A es una sustancia no retenida, son 0.84, 10.60 y 11.08 minutos, respectivamente. a) Calcular los tiempos de retencin corregidos y los factores de capacidad para B y C. b) Sabiendo que los anchos de banda en la base para B y C son 1.21 y 2.10 segundos respectivamente, calcular la resolucin entre estos dos picos. Problema 11. En una columna tubular abierta de paredes recubiertas de 15 m de longitud y 0.25 mm de dimetro interno, el gas portador circula a un caudal de 3 ml/min. Sabiendo que los tiempos de retencin para el heptanoato de metilo y para el octanoato de metilo son de 60 y 89 s respectivamente, y que el nmero de platos tericos de la columna es de 3000, calcular: a) El tiempo muerto (suponer despreciable el espesor de la fase estacionaria) b) El factor de capacidad o de retencin c) La anchura en la base de cada compuesto d) La resolucin entre picos e indicar si estn resueltos hasta lnea base

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Problema 12. Los datos de la tabla se obtuvieron a partir de un cromatograma de una muestra con tres componentes: tR, k N min A 2.8 13204 B 5.7 1.05 21897 C 6.7 1.41 30115 Con estos datos, sabiendo que el caudal de fase mvil fue de 1.0 ml/min y teniendo en cuenta que el cromatograma no es ideal, calcular: a) Volumen muerto de la columna y factor de retencin de A. Qu indica el resultado obtenido? b) Ancho en la base de los picos. c) Resolucin entre los picos de Ay B y entre los picos de B y C. d) Qu eficacia mnima se requiere para que un cuarto componente, D, con tiempo de retencin de 4.5 min salga resuelto, al menos aceptablemente de B (Rs=1). Problema 13. Utilizando el Cromatograma calcule:
a) El factor de retencin para cada pico b) El factor de selectividad para los picos 3 y 4 c) El nmero de platos tericos para el pico nmero 3 empleando el valor de W d) La resolucin entre los picos 1 y 2.:

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Problema 14. Usando el cromatograma, calcule el nmero de platos tericos para el pico nmero 1 empleando el valor de W. Calcule tambin la resolucin entre los picos 3 y 4.

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III. METODOS DE CUANTIFICACIN EMPLEADOS EN CROMATOGRAFA
Problema 15. Se separ una mezcla con teofilna y materiales relacionados por HPLC empleando THF 1%, Acetonitrilo 20%, H3PO4 0.1 % y el resto agua. Se identificaron sus componentes mediante los tiempos de retencin. Empleando las mismas condiciones de la separacin, al inyectar una mezcla estndar y una muestra problema con teofilna, se presentaron los siguientes datos: Muestra estndar Muestra problema con teofilina Pico Sustancia rea Composicin Sustancia rea 1 Teobromina 2487 10 L/mL Teobromina 3578941 2 Teofilna 25645 20 L/mL Teofilna 2113847 3 -Hidroxilpropil 1334 10 L/mL -Hidroxilpropil 1654872 teofilna teofilna 4 Cafena 1459 20 L/mL Cafena 22456 Calcular el % de cada componente en la muestra Problema 16. Se desea conocer la composicin porcentual de contaminantes presentes en el aire de una zona de la ciudad. Para ello, se muestrea adecuadamente el aire y somete a anlisis cromatogrfico; se obtiene lo siguiente: tR(min) 3.1 3.9 5.5 6.8 7.2 8.7 11.6 18.3 22.3 Compuesto sulfuro de hidrogeno Carbonil sulfuro Metil mercaptano Dimetil sulfuro Disulfuro de carbono Bromo cloro metano 1,4-difluorobenceno Clorobenceno 4-bromofluorobenceno UA 39 540 19 320 62 220 59 300 722 770 392 730 18 200 17 050 19 030

Suponiendo que los compuestos de la tabla son los nicos contaminantes del aire de la muestra y adems que el detector presenta igual sensibilidad para todos los componentes analizados, Cul es la composicin porcentual de los contaminantes?

Problema 17. La buprenorfina es un derivado de la tebana que produce efectos tpicos de agonistas opioides mu de larga duracin y potentes efectos antagonistas. Una enfermera prepar 5 mL de solucin de buprenorfina y procedi a administrar 3 mL a un paciente que pesa 81 kg. Los 2 mililitros restantes fueron guardados en refrigeracin para utilizarlos al da siguiente. Sin embargo, el paciente muri a las pocas horas, y ahora la enfermera enfrenta cargos legales por negligencia mdica. Para resolver este delicado asunto, se prepar un estndar pesando 11.8 mg de estndar de clorhidrato de buprenorfina puro, exactamente pesado y transferido a un matraz volumetrico de 25 mL, se aadieron 20 mL de fase mvil, se disolvi y se llev a volumen con fase mvil. Luego se tom 3.0 mL de esta solucin y se llev a 100 mL con fase mvil. Los 2 mL de la solucin preparada por la enfermera se pasaron a un matraz volumetrico de 50 mL y se llevaron a volumen con fase mvil. Se inyect por separado 20L de la preparacin del estndar y de la preparacin de la muestra al cromatgrafo HPLC. Para la solucin estndar se obtuvo un rea de 60325 UA para el pico de buprenorfina.

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Por otra parte, para la muestra preparada, el rea del pico de buprenorfina fue de 54477 UA. a) Cul es la concentracin (en mg de buprenorfina/mL) de la solucin preparada por la enfermera? Los pesos moleculares son 467.65 y 504.11 para la buprenorfina y el clorhidrato de buprenorfina respectivamente. b) Si la dosis mxima permitida de este medicamento es de 10g/kg de peso Se excedi esta dosis? Problema 18. Para determinar la cantidad de cocana presente en una grapa decomisada a un sujeto, se prepar primero un estndar pesando 0.050g de cocana pura y diluyendo hasta 100 mL en un solvente apropiado (HCl diluido). Se tomaron 5 mL de esta solucin, se diluyeron nuevamente hasta 50 mL y se inyectaron 20 L de esta ltima dilucin al cromatgrafo, obtenindose un rea de 9705 UA. Posteriormente se prepar la muestra pesando 605 mg de cocana decomisada y diluyendo a 100 mL. Se tomaron 10 mL de esta solucin y se llevaron a 100 mL, luego se tomaron 10 mL de esta solucin y se llevaron nuevamente a 100 mL. Al inyectar 20 L de la ltima dilucin al cromatgrafo se obtuvo un rea de 6130 UA para el pico de cocana. Cul es el porcentaje de pureza en la grapa decomisada? Problema 19. Una muestra se analiza por cromatografa de lquidos con la finalidad de cuantificar los componentes que la forman. Despus de inyectar una serie de estndares se encontraron los siguientes compuestos en la muestra: Pico Nmero Compuesto Area 1 cido lctico 654 2 cido actico 533 3 cido ctrico 205 4 cido fumrico 268 5 cido succnico 918 6 cido frmico 488

Problema 20. Para realizar un anlisis de drogas, se parte de 3mL de orina, se somete a una extraccin en fase slida, se eluye con un disolvente orgnico, se lleva a sequedad y finalmente se redisuelve en 0.5 mL de metanol y se aade dionina hasta una concentracin final de 10mg/L. Se inyecta 1 L de esta disolucin en un cromatgrafo de gases con detector de nitrgeno-fsforo. Los datos obtenidos se encuentran en la tabla de muestras. Se hace un calibrado preparando una mezcla de estndares de cocana, cafena y su patrn interno dionna. Se inyecta 1 L en el cromatgrafo de gases y se obtienen los resultados que se muestran en la tabla de calibrado. Los promedios de las recuperaciones obtenidas son 82% para cafena y 92% para cocana. Calcular la concentracin en mg/L y los mg por 100mL de estas drogas en la orina. (muestras) Compuesto rea Cafena 1736698 Cocana 435122 Dionina 1578336

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Compuesto Cafena Cocana Dionina (calibrado) rea Concentracin . mg/L 2437783 5 845129 5 1522794 10

Problema 21. Se obtuvieron los siguientes datos por cromatografa de gases con una columna cromatogrfica de 1.25 m tr, min w, min Concentracin, mg/L rea Aire 0.395 isopropilamina 4.59 0.365 1.0 20240 n-propilamina 4.91 0.382 2.5 40530 Calcular: a) El factor de capacidad o retencin para cada amina b) El factor de selectividad c) El nmero de platos y la altura de plato para la n-propilamina d) La resolucin entre las dos aminas e) La longitud de la columna necesaria para conseguir una resolucin de 1.5 y el tiempo necesario para que se eluya la n-propilamina suponiendo la misma velocidad lineal de flujo f) Si se utiliza isopropilamina como patrn interno en una concentracin de 1 mg/L y en un cromatograma de una muestra se obtienen reas de 23220 para la isopropilamina y de 35421 para la n-propilamina, cul ser la concentracin de n-propilamina en dicha muestra? Problema 22. El Xileno comercial es una mezcla de 3 ismeros y pueden separarse por medio de cromatografa de gases. Al estudiar una serie de estndares, los datos obtenidos fueron los siguientes: Ismero rea/L o-Xileno 2400 m-Xileno 2600 p-Xileno 2300 Al inyectar 0.5 L de una muestra problema, se reportaron los siguientes resultados: Concentracin Ismero rea (%) o-Xileno 540 m-Xileno 450 p-Xileno 240 Cul es el % en volumen respecto a cada ismero en la muestra problema de solvente? Problema 23. Se quiere comparar el contenido de licopeno en tomates frescos y en polvo de tomate. A un HPLC con detector uv/Vis, se inyectan 20 uL de un standar de 50 ug/mL, y se genera un pico correspondiente al licopeno de 7,587 UA. Por separado, se pesan 1.000 gr de cada muestra (de slidos obtenidos del tomate fresco y de polvo de tomate), y cada una se transfiere a un tubo de
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ensayo; a cada tubo se agregan 10 mL de tetrahidrofurano:metanol (1:1), se filtran las soluciones y a cada una se adicionan 5 ml de ter de petrleo y NaCl al 10%; las fracciones etreas se evaporan a sequedad, y cada una se reconstituye con 6 mL de hexano; se filtran y se inyectan 20 uL al HPLC, obtenindose los siguientes resultados: Muestra Tomate fresco Polvo de tomate UA para el pico de licopeno 23,205 14,163

Reporte el contenido de licopeno de cada muestra expresado como ug/g de muestra. Problema 24. Para medir serotonina (5-hidroxitriptamina) por el mtodo del patrn interno, a una alcuota de 1.0 mL de una disolucin de concentracin desconocida se le aade 1 mL de una disolucin que contiene 30 ng de N-metil-serotonina (patrn interno). Esta mezcla se trata adecuadamente para eliminar interferencias y se inyectan 10 L de la muestra, obtenindose un rea de 2573832 para la serotonina y de 171981 para la N-metilserotonina. Cuando se inyect un volumen equivalente de una mezcla que contena 5 ng de serotonina y 5 ng de N-metil-serotonina se obtuvieron reas de 3088598 y 3095672 respectivamente. Calcular la cantidad de serotonina en ng en la muestra original. Problema 25. Una muestra de 350 g de concreto contaminado por un derrame de aceite de transformador de la Calzada Independencia se trae a Ciencias Qumicas para analizar el contenido de Bifenilos Policlorados (BPCS, ascareles) ya que son compuestos sumamente txicos y se desea saber el impacto ambiental. Al llegar al CUCEI, la muestra se tritura cuidadosamente y se somete a extraccin con solventes adecuados. Al extracto se le agregan 6 g de 1, 2-dicloropropano y se aforan a 100 mL. Despus se toman 10 mL y se aforan a 100mL. Por ltimo se toman 5 mL y se aforan a 250 mL. Se inyectan 20 L al cromatgrafo y se obtienen los siguientes resultados: Componente BPCs 1, 2-dicloropropano Concentracin ( g/kg) Desconocida (ver adicin) rea 12157 86532

Por otro lado, se prepara una mezcla estndar y se inyectan 20mL al cromatgrafo, obtenindose los siguientes resultados: Componente BPCs 1, 2-dicloropropano Concentracin ( g) 48 133 g/Kg. Concreto rea 365463 465461

Calcula la concentracin de ascareles en

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Problema 26. El disolvente orgnico (Thinner) empleado para diluir pinturas, resinas y pegamentos puede ser analizado por cromatografa de gases para determinar su composicin porcentual. Para esto se inyecta primeramente 1 L de una solucin estndar de cada componente presente en la mezcla, los cuales son: Acetona, etanol, agua, y xileno(s). Los datos obtenidos de cada una de las soluciones se muestran en la tabla siguiente. Concentracin en la mezcla estndar reas de la muestra ( L/mL) Acetona 2134 10 34235635 Etanol 23455 20 22645367 Agua 234 10 11123456 Xileno(s) 312 20 12123 Una vez analizados los estndares se estableci la identidad de cada componente en la mezcla mediante el tiempo de retencin, al inyectar 1 L de la mezcla en el cromatgrafo de gases, empleando las mismas condiciones de los estndares, se encontr las reas de cada componente las cuales se presentan tambin en la tabla anterior. Calcula el % de cada componente en la muestra. Componente reas de la mezcla estndar Problema 27. Se desea determinar la concentracin de cido actico en un vinagre de manzana, se procede de la siguiente forma: Se toman 1.0312 g del vinagre y se llevan a 500 mL con un solvente adecuado. De esta dilucin 0.5 mL se diluyen nuevamente en 500 mL, y se inyectan 0.5 L a un GC con detector de ionizacin de flama. Se inyectan 0.5 L de una solucin estndar en las mismas condiciones y los resultados obtenidos se muestran a continuacin: Concentracin Muestra Area de pico (mg/mL de cido actico) Estndar 5 x 10 -5 32,357 Vinagre 37,515 Qu porcentaje de cido actico contiene el vinagre? Problema 28. Se desea conocer el comportamiento del Diclofenaco sdico inyectable reconstituido en una solucin de Glucosa inicialmente, a las 12 hrs, 24 hrs y a las 36hrs. Para eso se prepara un estndar pesando 17.4mg diluido en 25mL de fase mvil. La muestra de reconstitucin fue preparada tomando 4mL de la solucin inyectable mezclada en el frasco de solucin de Glucosa hasta 500mL, inyectando directamente de ah a los diferentes tiempos de muestreo. Las condiciones cromatogrficas fueron las mismas, solo que para el estndar se inyectaron 20uL y para la muestra 70uL. Las reas obtenidas fueron:
Estndar Solucin (0 hrs) Solucin (12 hrs) Solucin (24 hrs) Solucin (36 hrs)

41284

45389

42093

39840

36927

Si la presentacin de diclofenaco sdico inyectable es de 25mg/mL, Cunto fue el % que se obtuvo durante el estudio a los diferentes tiempos de muestreo?

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Problema 29. Se desea conocer el contenido de una solucin que contiene Hidrocortisona, Ciprofloxacino y Benzocana por medio de un anlisis en HPLC y as determinar si esta dentro de las especificaciones deseadas. Preparacin de la solucin Estndar de Ciprofloxacino: Se pesaron 12.0 mg de Clorhidrato de Ciprofloxacino monohidratado, despus se pasaron a un matraz volumtrico de 25mL. Se adicionaron 10mL de Fase Mvil y se someti a accin de ultrasonido para disolver durante 5 minutos. Finalmente se diluy y afor con fase mvil. Preparacin del Estndar: A continuacin se pesaron 20.0 mg de Benzocana y 10.0 mg de Hidrocortisona, se pasaron a un matraz volumtrico de 50mL, se adicionaron 10 mL de Acetonitrilo y 5 mL de la solucin estndar de Clorhidrato de Ciprofloxacino monohidratado, y se someti a accin de ultrasonido por 5 minutos. Se diluy y afor con fase mvil. De esta solucin se tom una alcuota de 2.0 mL y se pasaron a un matraz volumtrico de 50mL. Se diluy y afor con fase mvil. Preparacin de la muestra: Del frasco gotero se tom una alcuota de 2.0mL y se deposit en un matraz volumtrico de 100mL. Se diluy y afor con fase mvil. De la solucin anterior se toma una alcuota de 2.0mL y se pasan a un matraz volumtrico de 50mL. Se diluye y afora con fase mvil. Datos obtenidos: Preparacin estndar Muestra Problema Pico Sustancia Area Sustancia Area (mV.seg) (mV.seg) 1 Clorhidrato de ciprofloxacino 6088 Clorhidrato de ciprofloxacino 5836 2 Hidrocortisona 5620 Hidrocortisona 6041 3 Benzocana 7115 Benzocana 6876 a) Calcular la concentracin de Ciprofloxacino, Benzocana e Hidrocortisona en la muestra, en g/100 mL y reportar si esta dentro o fuera de especificaciones de acuerdo a la siguiente tabla: Especificaciones: VALORACION CIPROFLOXACINO 0.180 A 0.220 g/100 mL VALORACION BENZOCAINA 1.800 A 2.200 g/100 mL VALORACION HIDROCORTISONA 0.900 A 1.200 g/100 mL Peso molecular Ciprofloxacino: 331.34 Peso molecular Clorhidrato de Ciprofloxacino monohidratado: 385.84 Calcular la composicin porcentual de la muestra. Problema 30. En un laboratorio de control de calidad se quiere poner a punto un mtodo de anlisis por HPLC en fase inversa de una mezcla de dos compuestos A y B. Se sabe que, en columna de octadecil slice de 25 cm de longitud y utilizando una fase mvil de metanol-agua, los tiempos de retencin son 6.25 y 7.10 min respectivamente, el tiempo muerto es 1.4 min y la resolucin es 1.05. a) Cul debe ser la longitud de la columna para conseguir una resolucin de 1.5? b) Calcular los factores de retencin de A y B. Sern diferentes en la nueva columna? c) A partir de la siguiente tabla calcular la concentracin de A y B en la muestra. Muestra A, mg/L B, mg/L P.I., mg/L AreaA AreaB AreaPI 1 2.0 2.0 1.0 25542 36216 13320
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2 3 4 1.0 2.0 X 1.0 2.0 X 1.0 2.0 1.0 11830 24210 21240 18115 35980 15227 12320 26150 11425

Problema 31. Para conocer el contenido de hesperidina en aguacate de la variedad Hass se realiz un anlisis por HPLC. Para ello, se pesaron 15 mg pulpa seca de aguacate de la variedad Hass y se adicionaron 100 L de una solucin de 250 g/mL de catequina como sustancia de referencia; se complet el volumen a 2 mL; de esta solucin, se tomaron 200 L, y se ajust el volumen a 500 L, para despus inyectar al HPLC, producindose reas de 513 y 1985 para catequina y hesperidina, respectivamente; aparte, se prepar un estndar pesando 7 mg de catequina y 5 mg de hesperidina, se afor a 100 mL con metanol:acetonitrilo, y sta solucin se diluy 20 veces. Despus de inyectar al HPLC, se reportaron reas de 1351 y 1002 para catequina y hesperidina, respectivamente Cuntos miligramos de hesperidina estn presentes en un kilogramo de pulpa seca en esa variedad de aguacate? Problema 32. La determinacin de herbicidas e insecticidas clorados en alimentos, agua potable, suelo, etc. pueden ser determinados empleando cromatografa de gases con un detector de captura de electrones. El 4,4-DDT fue determinado en una muestra de 5.0 gr del suelo de una granja donde se empleo el insecticida, la muestra se coloca dentro de un extractor y se reflujarn 50 ml de hexano para extraer el plaguicida durante 1 hr. A 1.0 mL del extracto se le aade 1.0 ml de una solucin de Adrin (0.001 g/ml), de esta solucin se inyecta 1.0 L en el cromatgrafo y las reas resultantes para cada insecticida fueron de: 4, 4'-DDT= 13454 y Adrin= 2335682. Una mezcla estndar comercial que contiene 100 pg/ml de Adrin y 400 pg/ml de4,4'-DDT fue inyectada en el mismo cromatgrafo empleando las mismas condiciones que para la extraccin, para esta solucin se reporta una rea de 1273 para el Aldrin y 23455 para el 4,4'-DDT. Calcule la concentracin del DDT en la muestra de suelo (en pg/gr de suelo) Problema 33. Al analizar un licor por cromatografa de gases se obtuvieron los siguientes datos: N de estndar 1 2 3 4 Muestra Conc. De metanol (% vol) 0.01 0.05 0.08 0.10 Por investigar rea de unidades arbitrarias 235 1173 1884 2360 824 Las condiciones de medicin se conservaron constantes (Temperaturas, sensibilidad del detector, flujo del gas acarreador, etc.) Es importante considerar que el volumen de los estndares fue constante y bien medido, pero en la muestra fue inyectado el doble del volumen usual. Cul es la concentracin de metanol en el licor problema en % vol? Problema 34. Para calcular el factor de respuesta en un anlisis cromatogrfico, se realizaron tres determinaciones con cantidades diferentes de un analito A y de un estndar interno (EI), obtenindose los siguientes resultados:

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Muestra 1 2 3 A, mg/l 0.200 0.100 0.200 rea de A, u.a. 25532 11830 24110 EI, mg/l 0.100 0.100 0.200 rea EI, u.a. 13320 12320 25150

Una vez establecido dicho factor de respuesta, se analiz por triplicado una muestra que contiene el analito A y se aadieron 0.1000 mg/l del estndar interno a cada una de las alcuotas, obtenindose los siguientes datos: Muestra rea de A, u.a. 4 21010 5 21315 6 21240 Calcular la concentracin de A en mg/L. rea de EI, u.a. 11201 11500 11425

Problema 35. Para determinar la cafena de un caf instantneo, se procede de la siguiente forma: se pesan 0.8265 g del producto y se disuelven en 50 mL. Una alcuota de 5 mL se mezclan con 5mL de una solucin de acetato de plomo, se deja reposar 5 minutos y se filtra. Se inyecta al HPLC. Despus se prepara un estndar de cafena de 55 ppm y se inyecta en la misma cantidad, se obtiene: Muestra Estndar Caf instantneo Concentracin [ppm] 55 desconocida rea pico cafena 32525 8626

qu cantidad de cafena en mg/g de caf instantneo contiene el producto? Problema 36. Una solucin de corticosteroide es til en tratamientos de tumores qusticos, artritis reumatoidea o en artritis gotosa aguda entre otros. Al estudiar una muestra procesada paraconocer su concentracin de sus activos, Acetato de Metilprednisolona y Clorhidrato de Lidocana, se procede por la tcnica de cromatografa de lquidos usando Prednisona como sustancia de referencia. Al realizar la experimentacin y optimizar las condiciones, se obtiene la siguiente informacin: Muestra estndar Pico Compuesto 1 2 3 Acetato de Metilprednisolona Clorhidrato de Lidocana Prednisona

Conc. mg/mL) 0.200 0.050 0.300

(en rea 472654 105564 276543

Para la solucin de referencia se pesaron 159.0mg pasndolos en un matraz de 25mL llevando al aforo con cloroformo. Luego, para la preparacin de la muestra, se agito el frasco hasta homogeneizar su contenido. En un matraz volumtrico de 25 ml, se transfiere 1.0 ml de muestra, 10 ml de solucin de referencia, diluyendo con cloroformo a volumen. Con una pipeta pasteur se retira la capa superior y de la capa inferior, se pasan 2.0 ml a un recipiente adecuado, se agregan 15 ml
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de cloroformo y 200 mg de sulfato de sodio anhidro NOTA: (El Sulfato de sodio anhidro no se solubiliza, se utiliza pala eliminar la humedad). Al inyectar un volumen similar al de la muestra estndar resultaron los datos siguientes: Muestra Problema Pico Compuesto rea 1 AcetatodeMetilprednisolona 401765 2 ClorhidratodeLidocana 89346 3 Prednisona 234564 Qu cantidad en mg/mL de Acetato de Metilprednisolona y Clorhidrato de Lidocaina contiene la muestra sometida al anlisis? Problema 37. Una muestra se analiza por cromatografa de lquidos con la finalidad de cuantificar los componentes que la forman; Para evaluar la composicin, se inyect un estndar mltiple; aparte, 10 mL de la muestra se evaporaron bajo corriente de aire y se reconstituyeron a 1 mL en un solvente adecuado. Despus de inyectar al HPLC se obtuvieron los siguientes resultados: Estndar Muestra No. de Compuesto Composicin Area Composicin Area pico (%) (%) 1 Acido lctico 15 305 654 2 Acido actico 5 303 533 3 Acido ctrico 10 221 205 4 Acido fumrico 18 420 268 5 Acido succnico 22 415 918 6 Acido frmico 30 501 488 Calcular la composicin porcentual de la muestra. Problema 38. Para conocer el contenido de Tiamina HCl y Piridoxina HCl en un multivitaminico, se lleva a cabo un anlisis por HPLC. Despus de tener la columna, longitud de onda y condiciones cromatogrficas apropiadas, se procedi a preparar el estndar de la siguiente forma: Se transfiri a un matraz volumtrico de 100 mL una cantidad de 10.5 mg de estndar de referencia de Clorhidrato de piridoxina de 98.7 % de pureza y 21.8 mg de Clorhidrato de tiamina de 91.6% de pureza exactamente pesados. Se disolvi perfectamente con 80 ml de agua, y finalmente se llev a volumen con el mismo diluente y se mezcl. Preparacin de la muestra: Del lote del multivitaminico a analizar, se seleccionaron no menos de 20 ampolletas al azar y se vaci su contenido en un envase, se transfiri una alcuota de 4.0 ml a un matraz volumtrico de 100 ml, se agregaron 70 ml de agua para disolver, y se llev a volumen con el mismo diluente agitndose al final. Luego se tom una alcuota de 10.0 ml, se transfiri a un matraz volumtrico de 100 ml, llevndose a volumen con agua y mezclar perfectamente. Despus de inyectar volmenes iguales de la Preparacin del estndar y de la Preparacin de la muestra, de acuerdo a las condiciones descritas, se obtuvo lo siguiente:

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Muestra Estndar Muestra Problema Sustancia rea(mVseg) Sustancia rea(mVseg) Clorhidrato de 4563.8 Clorhidrato de 4736.9 Tiamina Tiamina 2 Clorhidrato de 9524.5 Clorhidrato de 8954.1 Piridoxina Piridoxina a) Calcular el contenido de Clorhidrato de Tiamina y Clorhidrato de Piridoxina en la muestra, en mg/2mL. Pico 1

Problema 39. Para determinar el contenido de glibenclamida (frmaco empleado en pacientes diabticos para controlar los niveles de glucosa en sangre) en una muestra plasmtica. Un estndar con 200 ng/mL de glibenclamida gener un pico de 5180 unidades de rea al ser inyectado en un HPLC con deteccin UV. Para examinar la muestra se mide 1 mL de plasma y se extrae con 3 mL de cloroformo, se evapora a sequedad y se reconstituye con 250 L de fase mvil. Al inyectar un volumen igual al del estndar, se obtuvieron los datos siguientes: Compuesto Glibenclamida Unidades de rea 7444

calcule el contenido de glibenclamida en la muestra reportando en g/mL de plasma. Problema 40. a) Sabiendo que, a un caudal de 1 ml/min, el pico cromatogrfico de la serotonina presenta un tiempo de retencin de 4.2 min y una anchura a media altura de 30 s, calcule el factor de capacidad, el nmero de platos y la altura equivalente de plato terico para una columna de 10 cm de longitud y 1.8 mL de volumen muerto b) Para medir serotonina (5-hidroxitriptamina) por el mtodo del patrn interno, a una alcuota de 1.0 mL de una disolucin de concentracin desconocida se le aade 1 mL de una disolucin que contiene 30 ng de N-metil-serotonina (patrn interno). Esta mezcla se trata adecuadamente para eliminar interferencias y se inyectan 10 L de la muestra, obtenindose un rea de 2573832 para la serotonina y de 1719818 para la N-metilserotonina. Cuando se inyect un volumen equivalente de una mezcla que contena 5 ng de serotonina y 5 ng de N-metil-serotonina se obtuvieron reas de 30885982 y 30956727 respectivamente. Calcular la cantidad de serotonina en ng en la muestra original

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RESULTADOS A ALGUNOS PROBLEMAS SELECCIONADOS. I.CROMATOGRAFA PLANAR

Problema 1. Solvente No. De mancha A 1 A 2 B 1,1 B 1,2 B 1,3 B 1,4 B 2,1 B 2,2 Valor de Rf 2.5/10 = 0.25 8/10 = 0.8 0.7/10 = 0.07 3.1/10 = 0.31 4.5/10 = 0.45 7.9/10 = 0.79 2.7/10 = 0.27 8.6/10 = 0.86

Problema 2. RfA = 49/61 = 0.8032; RfB = 33/61 = 0.5409 Problema 3. a) b) c) RfA = 0.45; RfB = 0.55; NA = 2916; NB = 2788; AEPTA = 0.0206; AEPTB = 0.0215; Rs = 2.67 = 1.2222

Problema 4. a) El primer pico a la izquierda corresponde al compuesto C, el segundo a B y el de la derecha es A. b) El orden de elucin seria: A, B, C. c) El orden de elucin debera ser: C, B, A. d) RfA = 3.2/6.1 cm = 0.5246; AEPTA = 0.0093 cm/etapa

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II. EVALUACIN DE PARMETROS CROMATOGRFICOS. Problema 5. Compuesto/ Producto STD Trimetoprima STD Sulfametoxazol Impureza sulfametoxazol Impureza Trimetoprima Excipiente

Valor de Rf de Referencia 0.574 (calculado) 0.777 (calculado) 0.6 0.7 0.8 0.9 < 0.5

Pfizer 0.776 0.653 -

Collins(*) 0.568 0.750 0.886 -

PiSA 0.630 0.804 0.478

Liferpal 0.554 0.643 0.321

Problema 6. Compuesto Metilciclohexano Metilciclohexeno Tolueno PROMEDIO Problema 7. a) = 1.656; Rs = 1.235 b) 172.18 cm Problema 8. Parmetro calculado tR (min) VR (mL) W (min) 1 0.666 2.0 0.146 Valor de k 2 5 0.999 2.0 3.0 6.0 0.219 0.438 10 3.66 11.0 0.804 N 960.87 980.66 886.93 942.82 AEPT

0.0424

Problema 9. Analito propoxur carbaryl 1-naftol methiocarb k 0.536 3.929 5.554 5.875 Rs 6.726 3.165 0.456 N 3448 Estn resueltos? Si Si No

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Problema 10. Analito B C tR 9.76 10.24 k 11.62 12.19 Rs 17.40

Problema 11. Analito Heptanoato de metilo Octanoato de metilo k 3.07 5.04 W (seg) 4.38 6.50 Rs 5.33 Si se resuelven hasta lnea base tM (seg) 14.73

III. METODOS DE CUANTIFICACIN EMPLEADOS EN CROMATOGRAFA

Problema 15. Teobromina = 50.01% Teofilna = 5.73% -Hidroxilpropil teofilna = 43.17% Cafena = 1.07% Problema 18. 52.19% de cocaina en la grapa decomisada Problema 20. 0.6984 mg de cafena/L de orina 0.06984 mg de cafena/100 mL de orina 0.449 m de cocaina/L de orina 0.0449 m de cocaina/100 mL de orina Problema 21. a) El factor de capacidad o retencin para cada amina = 10.62 y11.43 b) El factor de selectividad = 1.076 c) El nmero de platos y la altura de plato para la n-propilamina N = 2643; AEPT = 0.047 cm/etapa. d) La resolucin entre las dos aminas Rs = 0.0857 e) L = 403 cm f) Conc. = 1.904 mg/L Problema 23. 917.52 g de licopeno/g de Tomate fresco, 560.00 g de licopeno/g de Polvo de tomate Problema 24. 450 ng de serotonina

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Problema 25. 11.05 g/Kg Problema 26. % de Acetona = 24.46 %de Etanol = 2.94 % de Agua = 72.47 % de Xileno 0.118 Problema 27. 2.81% de cido actico en el vinagre Problema 28. 109.32% a t = 0 hrs 101.32% a t = 12 hrs 95.90% a t = 24 hrs 88.89% a t = 36 hrs. Problema 29. 6.18% de Ciprofloxacino (0.1975 g/100 mL) 60.22% de Benzocana (1.9328 g/100 mL) 33.6% de Hidrocortisona (1.074 g/100 mL) Problema 31. 6,196.66 mg de hesperidina/Kg de pulpa Problema 34. 0.194 mg de A/L Problema 35. 1.76 mg de cafeina/g de caf Problema 37. Acido lctico = 23.04 % Acido actico = 6.23 % Acido ctrico = 6.64 % Acido fumrico = 8.22 % Acido succnico = 34.90 % Acido frmico = 20.93 % Problema 38. 103.5 mg de Clorhidrato de Tiamina/2 mL de muestra 48.5 mg de Clorhidrato de Piridoxina/2 mL de muestra

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