Enzimologa I: Actividad Amilasa

Autores:

Armijo, Ariana.

Gonzlez, Sebastin. Hevia, Camila Saavedra, Francisca. Docente: Gonzlez Flies, Pamela Fecha del prctico: 02/10/2012 Fecha de entrega: 12/10/2012

OBJETIVOS. Conocer algunos de los procedimientos de laboratorio utilizados para manipular muestras biolgicas. Determinar la actividad de una enzima presente en una muestra biolgica. Verificar el efecto del pH y temperatura sobre la actividad enzimtica.

RESULTADOS
II.- Efecto del pH sobre la actividad de la amilasa salival:

En el tubo N 1 al cabo de 15 minutos de incubacin se agreg 2 gotas de Lugol, sta solucin adquiri un tono azulado indicando la presencia de almidn, en la base del tubo se observ un leve precipitado.

Fig.1 Tubo N1 con solucin Buffer pH 5.0

En el tubo N 2 transcurridos 15 minutos de incubacin se agreg las gotas de Lugol, sta solucin no adquiri un tono notorio, pero en la base del tubo se observ un leve precipitado.

Fig.2 Tubo N2 con solucin Buffer pH 6.0

En el tubo N 4 al cabo de 15 minutos de incubacin se agregaron 2 gotas de lugol, esta solucin no adquiri un tono notorio, pero en la base del tubo se observ un leve precipitado.

Fig.4 Tubo N4 con solucin Buffer pH 8.0

DISCUSIN
Este prctico tuvo como actividad conocer la actividad enzimtica de la amilasa salival cuya funcin principal es que hidroliza las uniones glucosdicas internas ( 1 4) del almidn, dando lugar a fragmentos cortos de polisacridos u oligosacridos (Nelson & Cox, 2009). Para que esta enzima presente una actividad cataltica ptima debe encontrarse en un rango de pH neutro (pH= 7). En los resultados obtenidos en el tubo N 1 hubo un reconocimiento de almidn con el reactivo de lugol, por lo cual se produjo una desnaturalizacin de la enzima amilasa debido a que el pH de este tubo era de un valor de 5.0, lo cual se aleja del rango ptimo y no sucedi actividad cataltica. En los tubos restantes el pH se acercaba hacia la neutralidad, por lo cual no se evidenci la presencia notoria de almidn, puesto que en estos tubos si hubo actividad cataltica y al haber hidrlisis del almidn, los productos que resultan de sta reaccin, como lo son la maltosa, maltotriosa y glucosa son azcares simples, debido a que el reactivo de Lugol reconoce especficamente polisacridos y no disacridos que resultan de la hidrlisis del almidn. A su vez se expuso a otros tres tubos de ensayos a diferentes temperaturas. En el tubo N1 y N3, el cual fue expuesto a una temperaturas extremas negativa y positiva (aprox. 0 y 100), se produjo un reconocimiento de almidn por parte del lugol, debido a esto se puede inferir que la enzima amilasa salival que se encontraba en dicha muestra perdi su funcionalidad, ya que la funcin es de romper azcares complejos como los del glucgeno utilizada en este procedimiento. A su vez en el tubo de ensayo N2 al incorporar lugol a la muestra este no reconoce azucares simples como la glucosa, la cual es obtenida por la amilasa salival a partir de la degradacin de glucgeno. Por lo cual se infiere que la temperatura optima para el funcionamiento de la enzima amilasa salival tiene su mayor capacidad de funcionamiento a una temperatura de 37. A la totalidad de los tubos mencionados anteriormente se le aplico NaCl. Al agregar NaCl este incrementa la T de la solucin por lo cual ocurre una desnaturalizacin de la enzima y no hay actividad cataltica, por lo cual no se detecta la presencia de almidn con el reactivo lugol. Es por este motivo que se debieron implementar temperaturas tan

extremas para que las enzimas concentradas en los tubos 1 y 3 se desnaturalizaran y las del tubo 2, a pesar de que se encontrara a una temperatura levemente elevada no lo hiciera.

CONCLUSIN

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1.- Nelson, D., Cox, M., Lehninger, A. (2009) Principios de Bioqumica (5 a Edicin) Barcelona, Ediciones Omega. (p.p 543)