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MICROBIOLOGIA
TEMA N 4
PROFESOR :
ALUMNA
2010
jehayra@gmail.com
(98)110*4183
1. Aplicar tcnicas de frotis de fijacin y coloracin. 2. Identificar las clulas de los alimentos mediante la tincin. 3. Conocer la tcnica mas utilizada en el estudio microbiolgico de cultivos bacterianos. 4. Reconocer clulas presentes en el tomate
FUNDAMENTACION Considerando que los microorganismos son seres que pueden ser vistos mediante el microscopio para diferenciar formas o estructuras; sin embargo la observacin de clulas vivas es limitada debido a sus clulas incoloras que presentan estas .Por ello se utiliza tcnicas de teido como: El Frotis que consta de la fijacin y el teido de microorganismos de acuerdo al numero de soluciones colorantes segn el objetivo y Tincin la cual puede ser simple, diferenciacin, seclectiva, o negativa.
MATERIALES
Porta objeto
Cubre objeto
Tomate
OTROS MATERIALES
1. probeta de 100 ml. 2. Vaso precipitado de 100 ml. 3. Mechero 4. Asa de siembra 5. Piceta de agua destilada 6. Microscopio 7. Azul de metileno. 8. Alcohol etlico.
PROCEDIMIENTO
Experiencia : clula de tomate
1. Cortar el tomate en 2 mitades. 2. Con una pinza, extrae 2 mm.de la pulpa del tomate. 3. Colocar la muestra en una lamina portaobjeto. 4. Colocar un cubre objeto sin aplastar la muestra. 5. Observar en el microscopio.
CONCLUSIONES
1. Por la estructura de estas clulas podemos diferenciarlas en procariotas y eucariotas segn sus caractersticas.
3. Podemos observar fcilmente la estructura mediante las tcnicas de tincin, fijacin, y frotis las cuales han sido ejecutadas en estas prcticas.
DIAGRAMA
Muestra de Tomate
(Fig. 1)
(Fig. 2)
(Fig. 3)
1. lavar
2. prender el mechero y esterilizar el asa en la flama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo.
3. dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los
microorganismos sean destruidos .despus acercar al mechero el tubo de cultivo, quitarle el tapn y flamear rpidamente en la boca del mismo. Introducir el asa en el tubo de cultivo y tomar cuidadosamente la muestra.
portaobjeto. Extenderla suavemente en el rea circular de 2 cm. de dimetro aproximadamente y esterilizar nuevamente el asa . Dejar secar el frontis al aire y repetir los procedimientos 3-4 por 2 a 3 veces.
5. si el cultivo es de medio slido previamente se colocara en el
portaobjeto una gota de agua destilada en la que se mezcla una pequea muestra del cultivo que se forma siguiendo las indicaciones del paso 3 . Extendera suavemente y dejar secar el aire.
1. fijar el frotis del cultivo liquido con dos gotas de metanol o etanol absoluto y dejar secar al aire(alejado al mechero)
2. los frotis de cultivo slido ,completamente secos se fijaron con el
calor .para esto se pasara el frotis rpidamente 2-3 veces en el interior de la parte amarilla de la flama del mechero 3. palpar la parte inferior del portaobjeto con el dorso de la mano izquierda para enfriar y comprobar que no hubo sobrecalentamiento.
1. cubrir el frotis con 2 gotas de azul de metileno durante 30 segundos a 1 minuto. 2. eliminar el exceso de colorantes con lavado suave el agua corriente o con la ayuda de la pipeta con agua destilada.
3. dejar secar al aire libre.
DIAGRAMA
Lavar, secar y etiquetar el portaobjeto. Esterilizar el asa de siembre en la flama de mechero. Dejar secar el asa de siembra Cultivo liquido,.extender la masa para esterilizar Cultivo slido.- colocar una gota de agua destilada.
Fijar en el frotis 2 gotas de metanol Dejar secar. Para Frotis slidos, la muestra se pondr en calor cogerlo y determinar si se encuentra sobrecalentado
Agregar al frotis 2 gotas de azul metileno Despus un suave lavado con agua destilada. Dejar secar.
CONCLUSIONES y RECOMENDACIONES.
objetivo. Para este es necesario una asa de siembra esterilizada para captar bacterias.
3. en la fijacin, se subdivide segn la muestra; segn sea slido
se utilizara calor y en lquidos gotas de metananol o etanol. 4. en el paso de fijacin se debe evitar el sobrecalentamiento.