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UNIVERSIDAD PRIVADA TELESUP

FACULTAD DE INGENIERIA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL


CURSO

MICROBIOLOGIA

TEMA N 4

: PREPARACION ,FIJACION Y COLORACION SIMPLE DE FROTIS. CASTILLO AMADO, LUIS

PROFESOR :

ALUMNA

CARDENAS RAMIREZ, JEHAYRA

2010

jehayra@gmail.com

(98)110*4183

TITULO: PREPARACION, FIJACION Y COLORACION SIMPLE DE FROTIS


OBJETIVO

1. Aplicar tcnicas de frotis de fijacin y coloracin. 2. Identificar las clulas de los alimentos mediante la tincin. 3. Conocer la tcnica mas utilizada en el estudio microbiolgico de cultivos bacterianos. 4. Reconocer clulas presentes en el tomate

FUNDAMENTACION Considerando que los microorganismos son seres que pueden ser vistos mediante el microscopio para diferenciar formas o estructuras; sin embargo la observacin de clulas vivas es limitada debido a sus clulas incoloras que presentan estas .Por ello se utiliza tcnicas de teido como: El Frotis que consta de la fijacin y el teido de microorganismos de acuerdo al numero de soluciones colorantes segn el objetivo y Tincin la cual puede ser simple, diferenciacin, seclectiva, o negativa.

MATERIALES

Porta objeto

Cubre objeto

Tomate

OTROS MATERIALES

1. probeta de 100 ml. 2. Vaso precipitado de 100 ml. 3. Mechero 4. Asa de siembra 5. Piceta de agua destilada 6. Microscopio 7. Azul de metileno. 8. Alcohol etlico.

9. fenol 2 % 10. Aceite de inmersin.

PROCEDIMIENTO
Experiencia : clula de tomate

1. Cortar el tomate en 2 mitades. 2. Con una pinza, extrae 2 mm.de la pulpa del tomate. 3. Colocar la muestra en una lamina portaobjeto. 4. Colocar un cubre objeto sin aplastar la muestra. 5. Observar en el microscopio.

CONCLUSIONES

1. Por la estructura de estas clulas podemos diferenciarlas en procariotas y eucariotas segn sus caractersticas.

2. La clula eucariota es tpicamente mayor y estructuralmente ms compleja que la clula procariota.

3. Podemos observar fcilmente la estructura mediante las tcnicas de tincin, fijacin, y frotis las cuales han sido ejecutadas en estas prcticas.

4. Segn la practica, la forma, la estructura ha sido eucariota

DIAGRAMA

Muestra de Tomate

(Fig. 1)

Muestra del tomate en porta objeto

Muestra del tomate

(Fig. 2)

(Fig. 3)

Experiencia : preparacin del frotis.

1. lavar

perfectamente los portaobjetos, secarlos con papel y etiquetarlos.

2. prender el mechero y esterilizar el asa en la flama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo.
3. dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los

microorganismos sean destruidos .despus acercar al mechero el tubo de cultivo, quitarle el tapn y flamear rpidamente en la boca del mismo. Introducir el asa en el tubo de cultivo y tomar cuidadosamente la muestra.

4. para el caso de cultivos lquidos, colocar la muestra en ele centro del

portaobjeto. Extenderla suavemente en el rea circular de 2 cm. de dimetro aproximadamente y esterilizar nuevamente el asa . Dejar secar el frontis al aire y repetir los procedimientos 3-4 por 2 a 3 veces.
5. si el cultivo es de medio slido previamente se colocara en el

portaobjeto una gota de agua destilada en la que se mezcla una pequea muestra del cultivo que se forma siguiendo las indicaciones del paso 3 . Extendera suavemente y dejar secar el aire.

Experiencia : Fijacin del frotis.

1. fijar el frotis del cultivo liquido con dos gotas de metanol o etanol absoluto y dejar secar al aire(alejado al mechero)
2. los frotis de cultivo slido ,completamente secos se fijaron con el

calor .para esto se pasara el frotis rpidamente 2-3 veces en el interior de la parte amarilla de la flama del mechero 3. palpar la parte inferior del portaobjeto con el dorso de la mano izquierda para enfriar y comprobar que no hubo sobrecalentamiento.

Experiencia : tincin simple

1. cubrir el frotis con 2 gotas de azul de metileno durante 30 segundos a 1 minuto. 2. eliminar el exceso de colorantes con lavado suave el agua corriente o con la ayuda de la pipeta con agua destilada.
3. dejar secar al aire libre.

DIAGRAMA

(fig.4) PREP. DEL FROTIS FIJACIN DEL FROTIS TINCIN SIMPLE

Lavar, secar y etiquetar el portaobjeto. Esterilizar el asa de siembre en la flama de mechero. Dejar secar el asa de siembra Cultivo liquido,.extender la masa para esterilizar Cultivo slido.- colocar una gota de agua destilada.

Fijar en el frotis 2 gotas de metanol Dejar secar. Para Frotis slidos, la muestra se pondr en calor cogerlo y determinar si se encuentra sobrecalentado

Agregar al frotis 2 gotas de azul metileno Despus un suave lavado con agua destilada. Dejar secar.

CONCLUSIONES y RECOMENDACIONES.

1. esta secuencia de pasos nos permite tener una organizacin

de investigacin, utilizando tanto materias primas slidas como liquidas.


2. la preparacin del frotis consta de anticipar el experimento

objetivo. Para este es necesario una asa de siembra esterilizada para captar bacterias.
3. en la fijacin, se subdivide segn la muestra; segn sea slido

se utilizara calor y en lquidos gotas de metananol o etanol. 4. en el paso de fijacin se debe evitar el sobrecalentamiento.

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