Nematodos Entomopatogenos

NEMATODOS COMO AGENTES DE CONTROL BIOLGICO
EDNA PAOLA BECERRA E Ing. Agronmica
Seminario elementos de microbiologa agrcola 2008-II
CONTENIDO
Introduccin Familias Plagas que controlan Ubicacin taxonmica de los nematodos entomopatgenos Ciclo de vida Relacin simbitica (Bacterias) Modo de accin Formulacin y comercializacin Estudio de caso
CONTENIDO
Introduccin Principales familias Plagas que controlan Ubicacin taxonmica de los nematodos entomopatgenos Ciclo de vida Relacin simbitica (Bacterias) Modo de accin Formulacin y comercializacin Estudio de caso
INTRODUCCIN
Los nematodos son organismos invertebrados, multicelulares de forma alargada y cilndrica asemejndose a un gusano (Nematoda, del griego nema, "hilo", eids u oidos, "con aspecto de"). Estos presentan cuerpo no segmentado y simetra bilateral.
NEMATODOS ENTOMOPATGENOS
Agentes de Control Biolgico Organismos que parasitan larvas de insectos causando su muerte. Fcil produccin, adaptabilidad en campo, buena capacidad de bsqueda (Parada, 2001).
CONTENIDO
Introduccin Familias Plagas que controlan Ubicacin taxonmica de los nematodos entomopatgenos Ciclo de vida Relacin simbitica (Bacterias) Modo de accin Formulacin y comercializacin Estudio de caso
Familias
Tetradonematidae Allantonematidae Sphaeruliidae Phaenopsitylenchidae Mermithidae
Heterorhabditis megidis
Heterorhabditidae Steinernematidae
Steinernema feltiae
CONTENIDO
Plagas que controlan

Colepteros Chizas
Phyllophaga spp. (Coleoptera: Melolonthidae)
Ancognatha scarabaeioides (Coleoptera: Scarabaeidae)
creatures.ifas.ufl.edu/field/white_grub4.htm

Otros colepteros de importancia econmica
Premnotrypes vorax (Coleoptera: Curculionidae) Hypothenemus hampei (Coleoptera: Curculionidae)

Lepidpteros
Phthorimaea operculella (Lepidoptera: Gelechiidae) Tecia solanivora (Lepidoptera: Gelechiidae),

Galleria mellonella (Lepidoptera: Pyrallidae)

Otras
Cyrtomenus bergi (Hemptero: Cydnidae) Chinche de la yuca
CONTENIDO
Ubicacin taxonmica
Reino: Animalia Phylum: Aschelmyntes (Nematoda) Clase: Secernentea Orden: Rhabditida Familia: Heterorhabditidae y Steinernematidae Genero :Heterorhabditis y Steinernema Especie: spp.
Especies
Steinernema feltiae S. scarabaei S. carpocapsae Heterorhabditis Bacteriophora H. megidis
S. carpocapsae
H. bacteriophora
CONTENIDO
Ciclo de vida
Ciclo de Nematodos Huevo JI Primera muda J2 Segunda muda J3 (infectivo) Tercera muda J4 Cuarta muda adulto
JI liberan toxinas El hospedante Y fase I del muere y se bacterio torna crema produce antibiticos Y toxinas 1 Generacion Ingresan por de adultos la cutcula hermafroditas
Juveniles infectivos Localizan el hospedante
Eficiente reproduccin Y desarrollo de huevos J1, J2, J3 y J4
Juveniles infectivos J3 emergen Del cadaver del hospedante Fase I del bacterio Coloniza nematodos
Eficiente produccin Y desarrollo de Huevos J1, J2, J3
2da Generacin De adultos Tamao 50% menor Que la 1G
CONTENIDO
RELACIN SIMBITICA
BACTERIAS
Photorhabdus luminiscens Xenorhabdus bovienii
Heterorhabditis
Steinernema
Bacteria simbionte
Familia Enterobacteriaceae Bacilos Gram negativos Mviles por medio de flagelos o cilios No se encuentran en estado libre en la naturaleza Photorhabdus spp son bioluminiscentes y producen pigmentos amarillos o rojos (no es comn en Enterobacteriaceae) Fijan el cadver del hospedante en color rojo purpreo, anaranjado, amarillo, castao. Produce antibiticos Xenorhabdus spp presenta fase I y fase II ( estacionaria). es catalasa negativa y no reduce nitrato (no es usual en Enterobacteriaceae) Se encuentra en el intestino posterior de los J3.
Diferencias
(Forst y Nealson, 1996)
Relacion simbiotica
BACTERIA
Es incapaz de vivir en el suelo y se debe alojar en el intestino del juvenil Depende del juvenil infectivo para llegar al hemocele (cavidad sangunea) del hospedante Recibe proteccin del nematodo, el cual inhibe las defensas antibacterianas del hospedante.
Fuente: www.cost850.ch/welcome.html
NEMATODO
La bacteria mata al hospedante rpidamente y crea un ambiente conveniente para el desarrollo del nematodo, produciendo antibiticos que suprimen competencia de microorganismos. La bacteria transforma los tejidos del hospedante en una fuente de comida para el nematodo. La bacteria sirve como fuente de comida para el nematodo ( Parada et al 2002). La reproduccin es optima cuando esta en simbiosis con la bacteria.
Heterorhabditis bacteriophora infected waxmoth larvae. 36 hours post-infection, these larvae glow due to the symbiotic bacteria, P. luminescens.
http://www.oardc.ohiostate.edu/nematodes/using_insect_parasitic_n ematodes.htm
Cranberry rootworm larvae and pupa (middle) infected with H. bacteriophora
(a) Larva sana (crema); (b) Steinernema feltiae - cafe (c) Steinernema carpocapsae - infected (marron claro) (d) Heterorhabditis bacteriophora infectado (rojo) larvae of Galleria mellonella.
Caractersticas de las bacterias simbiontes
Caractersticas de las bacterias (Forst y Nealson, 1996) simbiontes
Antibiticos: Xenorhabdinas, xenocumacinas, Hydroxistilbenes, Indoles derivados de antibiticos. Pigmentos: derivados de Antraquinona Menor actividad en la fase II Seminario elementos de
microbiologa agrcola 2008-II
Especies de bacteria y hospederos
A dissected Japanese beetle larva showing later stages of the Heterorhabditis bacteriophora nematode. Seminario elementos de http://www.pueblo.gsa.gov/cic_text/housing/japanese-beetle/jbeetle.html
Fuente:
Seminario elementos de microbiologa agrcola 2008-II http://el-atracio.blogspot.com/search/label/Cusco
CONTENIDO
Modo y mecanismo de accin

Bsqueda de su hospedero, Produccin de secreciones enzimticas para entrar al cuerpo a travs de la boca, ano y espirculos del insecto hasta llegar a la hemocele. El nematodo obtiene el alimento de la hemolinfa El nematodo regurgita la bacteria El hospedero muere 48 horas posterior a la inoculacin Los infectivos salen del cadver a los 12-14 das despus de la infeccin. de Seminario elementos
CONTENIDO
Requerimientos medioambientales
Objetivo: mantener la movilidad y viabilidad del nematodo Temperatura: 12-18C Luz: Aplicacin en la tarde para que la radiacin UV no afecte los nematodos y aplicar con protectantes Humedad del suelo: capacidad de campo Textura del suelo: no compactada
Formulacin Gel alginato
Descripcin Contenedor de 0,5 litros, 10 millones de nemtodos atrapados en matriz. Contenedor de 4 litros, 250 millones de nemtodos atrapados en matriz.
Almacenamiento 5 meses a temperatura ambiente, 12 meses con refrigeracin. 3 meses a temperatura ambiente, 6 meses con refrigeracin.
Gel poliacrilamida
3 billones de nemtodos por caja (25 x 40 x 60 cm), 109 nemtodos atrapados en 2 kg. 50 millones de nemtodos dispersos en 80 g de arcilla. 250 millones de nemtodos suspendidos en matriz encerrada en bolsa plstica (40 x 50 cm).
5 das a temperatura ambiente, 3 meses con refrigeracin.
Arcilla
3 meses con refrigeracin.
Gel soluble
3 meses a temperatura ambiente, 6 meses con refrigeracin.
Comercializacin
NemaSeek - Beneficial Nematodes - H. bacteriophora 10 milliones de nematodos NEMOPAKH heterorhabditis bacteriophora nematodos entomopatgenos de larvas de colepteros. 50 millones de larvas infectivas de nematodos B-Green Dependiendo del envase, contiene 50 500 millones de nemtodos juveniles. Los envases de 50 y 500 millones de nemtodos permiten respectivamente el tratamiento de una superficie de 100 m y 1.000 m. PROBIONE
Guardian T - Heterorhabitis bacteriorphora Prod. ID: 2210BT Seminario elementos de
CONTENIDO
Estudio de caso
Aislamiento de Xenorhabdus bovienii, simbionte de Steinernema feltiae (Rhabditida: Steinernematidae), cepa colombiana (Trivio et al., 2006).
Aislamiento de Xenorhabdus bovienii, simbionte de Steinernema feltiae (Rhabditida: Steinernematidae), cepa colombiana
Objetivo Aislamiento de X. bovienii, simbionte de S. feltiae, cepa colombiana como etapa inicial para determinar la cintica de poblacin en medios de cultivo.
Introduccin
La bacteria presenta dos fases: La fase I es de gran importancia en el proceso patognico, provee mas nutrientes al nematodo. La fase II se observa cuando los nematodos abandonan el cadver, en esta fase pierde algunas funciones metablicas aun no es claro los mecanismos de variacin de fase.
Introduccin
FI forman colonias redondas pequeas, adsorbe rojo neutral en McConkey y en NBTA adsorbe Azul de Bromotimol y degradan cloruro de trifeniltetrazolio FII Las colonias son mas grandes y no adsorben colorantes pero se ties de rojo al degradarse el CTT Es un proceso reversible identificado como fase de variacin inversa
Materiales y mtodos
AISLAMIENTO: Aislamiento a partir de hemolinfa de larvas de G. mellonella de ultimo instar. CARACTERIZACIN Medio NBTA (agar + 0,0025% azul de bromotimol + 0,004% de cloruro de trifeniltetrazolio) Agar McConkey para evidenciar las dos formas de la bacteria Criterio de seleccin de la bacteria asimilacin de azul de bromotinol a las 42 horas despus de incubacin. Descripcin de las colonias y pruebas bioqumicas
Materiales y mtodos
El cultivo base se inicio transfiriendo una de las colonias aisladas a un medio liquido YS, incubando a 25C durante dos das, en agitacin a 200rpm. Las bacterias Fase I y fase II fueron almacenadas en medio con glicerol al 15%, en Eppendorf a -80 C. ACTIVIDAD ANTIBIOTICA: Se evalu en fase I sobre Bacillus cereus, inoculando una placa de esta con 24 horas de crecimiento en medio nutritivo distribuyndolo en el agar. Se pusieron discos de papel filtro impregnados con X. bovienii de 24 horas de crecimiento en medio nutritivo. Registro del tamao de las zonas de inhibicin a las 24 horas.
Materiales y mtodos
Patogenicidad:
Soluciones (10ml) buffer fosfato (50nM) 90.000.000 - 900.000 - 90.000 - 9.000 - 900 - 9 clulas/ml. ( 25 larvas por dosis) Fueron inyectadas va oral con jeringa, en el hemocele de las larvas de ltimos instares de G. mellonella. Las larvas se dispusieron en cajas de petri y se incubaron a 21C en oscuridad. Se registro la mortalidad y cambio de coloracin de la cutcula durante 24 72 horas. Control: solucin salina
Resultados y discusin
Aislamiento y caracterizacin de X. bovienii
Fase I Descripcin de la colonia Agar McConkey Agar NBTA circulares convexas, granuladas, opacas, con borde irregular Coloracin rojo y rosado Color azul-verde con zona clara alrededor Fase II Planas, traslucidas, con margen regular y mayor dimetro Blancas o amarillas Rojas- marrn sin zona clara alrededor
No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
20 21 22 23 24 25 26 27
Bioqumicas Arabinosa Manosa Sacarosa Melibiosa Ramnosa Sorbitol Manitol Adonitol Galactosa Inositol p-n-p-fosfato p-n-p-a- glucosido p-n-p-galactosido Prolina nitroanilida p-n-p-bis fosfato p-n-p-xilosido p-n-p-a-arabinosido p-n-p-fosforilcolina p-n-p-a- glucoronido
p-n-p-N- acetil glucosamida L-glutamil p-nitroanilida Esculina p-nitro-DL-fenilalanina urea glicina citrato acido malonico
Aislamiento + + + + + + + + + + + + + + D + -
Literatura + + + + + + + + + + + + D +
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Bioqumicas complementarias lactosa sacarosa glucosa + produccin de gas rojo de metilo + voges Proskauer sulfuros indol D + movilidad + nitratos + gelatina catalasa oxidasa + patogenicidad en larvas + + adsorcion de azul de bromotinol + + colonia en Agar McConkey Roja Marrn Seminario elementos de microbiologa agrcola 2008-II
28 cloruro de trifenil tetrazolio 29 arginina 30 lisina
Actividad antibitica Se presentaron zonas de inhibicin de crecimiento con reas promedio de 0,43 cm2 de Bacillus cereus por actividad antibitica de X. bovienii. El control no presento crecimiento de B. cereus . La actividad antibitica permite un ambiente adecuado para el nematodo ya que infecta invasores secundarios.
Patogenicidad Transcurridas 24 horas se registro un 70% de mortalidad de larvas de G.mellonella. Se obtuvieron cultivos puros de X. bovienii y se observo la rpida patogenicidad sobre el hospedante comparadas con otras sepas evaluadas por otros autores.
Conclusiones Generales
Los nematodos son Agentes de Control Biolgico que pueden ser usados en MIP. Las principales especies son Heterorabditis bacteriophora y Steinernema spp. El Nematodo es efectivo gracias a las bacterias simbiontes de los gneros Xenorhabdus y Photorhabdus. Se ha comprobado su accin en plagas de importancia econmica. Es eficaz gracias a que el nematodo busca a su hospedero y la bacteria permite la entrada y muerte del mismo.
GRACIAS

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Ancognatha scarabaeioides (Coleoptera: Scarabaeidae)

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Plagas que controlan

Phthorimaea operculella (Lepidoptera: Gelechiidae) Tecia solanivora (Lepidoptera: Gelechiidae),

Galleria mellonella (Lepidoptera: Pyrallidae)

Plagas que controlan

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Juveniles infectivos Localizan el hospedante

Eficiente reproduccin Y desarrollo de huevos J1, J2, J3 y J4

Eficiente produccin Y desarrollo de Huevos J1, J2, J3

2da Generacin De adultos Tamao 50% menor Que la 1G

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Photorhabdus luminiscens Xenorhabdus bovienii

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(Forst y Nealson, 1996)

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Cranberry rootworm larvae and pupa (middle) infected with H. bacteriophora

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Caractersticas de las bacterias simbiontes

(Forst y Nealson, 1996)

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Caractersticas de las bacterias (Forst y Nealson, 1996) simbiontes

Especies de bacteria y hospederos

(Forst y Nealson, 1996)

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Modo y mecanismo de accin

Formulacin Gel alginato

5 das a temperatura ambiente, 3 meses con refrigeracin.

3 meses con refrigeracin.

3 meses a temperatura ambiente, 6 meses con refrigeracin.

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28 cloruro de trifenil tetrazolio 29 arginina 30 lisina

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