Repblica Bolivariana de Venezuela Universidad del Zulia Facultad Experimental de Ciencias Departamento de Biologa Lab.

de Organismos Fotosintticos

Cultivo de Spirulina platensis empleando aguas residuales de cerdo en un proceso semicontinuo

Chaiklahan Ratana*, Nattayaporn Chirasuwan, Wipawan Siangdung, Kalyanee Paithoonrangsarid and Boosya Bunnag

Presentado por: Br. Juan C. Borrego

Maracaibo, abril del 2012

INTRODUCCIN
Las aguas residuales provenientes de la cra de cerdo son una fuente muy importante de contaminacin. Los residuos de cerdo contienen una demanda bioqumica de oxgeno muy elevada. El estircol de cerdo tambin contiene un alto nivel de residuos orgnicos: Alrededor de 5.4 a 6.3 kg de nitrgeno/ton y 2.2-3.1 kg de fsforo/ton. Ambos son necesarios para el crecimiento de microalgas.

Los sistemas de digestin anaerobia, tales como la laguna de cubierta, digestor de flujo de pistn o la manta de lodo anaerbico de flujo ascendente (UASB) se utilizan ampliamente para el tratamiento de los residuos de explotaciones de ganado porcino. Las cantidades de nutrientes de estos sistemas son suficientes para el crecimiento de algas La cianobacteria Spirulina es una de las microalgas ms utilizado para el tratamiento de aguas residuales porcina.

Spirulina tiene un alto potencial para su uso

como alimento para animales. Es una rica fuente de protenas, aminocidos

esenciales, vitaminas, cidos grasos esenciales,

antioxidantes y pigmentos, como carotenoides y ficocianina. Aumenta la supervivencia y el crecimiento de varios tipos de animales (pescado,

pollo, cerdos).
Ofrece varias ventajas, incluyendo un importante ahorro en el costo del medio de cultivo, si es proporcionado carbono inorgnico para mejorar su crecimiento.

El objetivo de este estudio fue producir Spirulina con los efluentes de una granja de cerdos UASB.

MATERIALES Y METODOS
El inculo de Spirulina platensis BP

Se cultiv: Al aire libre Temperatura ambiente

Agitacin con un flujo de 150 Lts/hora

En 10 L de medio Zarrouk: 16,8 g de NaHCO3, 2,5 g de NaNO3, 0,5 g K2HPO4, 1,0 g de NaCl, 0,2 g MgSO4 7H2O, 0,04 g de CaCl2, 1,0 g K2SO4, 0,08 g de EDTA y 0,01 g FeSO4 7H2O. (por Litro). Despus de 7-10 das, la concentracin de clorofila a alcanz aproximadamente 25 mg/L. Todos los experimentos realizados en este estudio se inocularon con 20% (v/v) del inoculo de S. platensis BP.

S. platensis PA se cultiv en un recipiente de 6 L de modo semicontinuo de cuatro medios. El medio modificado de Zarrouk que contena 8 g/L de NaHCO3 (control). El medio 1 = 20% de un efluente de un tratamiento UASB (Efluente UASB) instalado en una granja de cerdos; 3,5 g/L de NaHCO3, y 0,2 g/L de urea (46:0:0, N:P:K). El medio 2 = 20% del efluente UASB, 4,5 g/L de NaHCO3, y 0,2 g de urea/L.

El medio 3 = 20% del efluente UASB, 3,5 g/L de NaHCO3, y 0,2 g/L de fertilizante N:P:K (16:16:16).

Manteniendo Clorofila a en 5 mg/L Bombeo de aire.

 Se recogi el 30% del volumen total del cultivo cada 2-3 das

Las clulas de S. platensis BP se separaron luego por filtracin.

Se aadi medio fresco al sistema despus de cada cosecha.

Los resultados de este experimento se usaron para seleccionar un medio adecuado para su uso en un experimento a escala piloto en 100-L estanques abiertos de rodadura con una profundidad cultivo de 15 cm. La mezcla fue facilitada por ruedas de paletas que faciliten la velocidad del agua a 12 rpm.
La evaporacin fue contrarrestada por la adicin del mismo nivel de agua dulce cada maana.

 La concentracin celular se midi con la concentracin de clorofila a utilizando extraccin con metanol y la posterior determinacin de la absorbancia a 665 nm.

Se determino el peso seco (24 horas a 80C).

Los niveles de alcalinidad, fsforo y nitrgeno-nitrato en los filtrados se determinaron utilizando el mtodo de titulacin, mtodo vanadomolibdofosfrico colorimtrico, y el mtodo de deteccin espectrofotomtrico ultravioleta, respectivamente.

La concentracin de nitrgeno amoniacal se determin por el mtodo de salicilato.

 El contenido de protena se determin por el mtodo de Lowry.

Los cidos grasos se analizaron mediante una versin modificada del mismo mtodo, y los steres metlicos de cidos grasos fueron identificados por cromatografa de gases.
El contenido de ficocianina se estim despus de la extraccin en un buffer fosfato (pH 7,0) siguiendo los procedimientos descritos por Boussiba y Richmond. Todos los experimentos se llevaron a cabo por duplicado o triplicado. Los resultados de los anlisis fueron sometidos a anlisis de varianza (ANOVA) con el nivel de confianza del 95% (P <0,05) para verificar diferencias significativas en la productividad, la composicin de las clulas, y el nivel de nutrientes que quedan en los filtrados.

RESULTADOS Y DISCUSIN
Caractersticas de los efluentes UASB de una granja de cerdos:

Para evitar la inhibicin del crecimiento debido a exceso de amonaco, la Spirulina se cultiv en 20% del efluente UASB (v/v).

El carbono adicional y nitrgeno, se aade para aumentar el crecimiento de Spirulina a un nivel econmicamente factible.
Por lo tanto, en este estudio, bicarbonato de sodio se aadi a 20% de UASB a una concentracin de 3,5 a 4,5 g/L en conjuncin con 0,2 g/L de urea o fertilizanrte N:P:K para identificar un medio adecuado para el cultivo de S. platensis.

La productividad de S. platensis BP y Composicin de la clula:

En un estudio escala 6-L, las productividades promedio de S. platensis BP cultivado en el medio 2 y 3 era de 19,9 g/m2/d y 20,1g/m2/d, respectivamente.

El medio 2 se consider un medio adecuado y por lo tanto utilizada para la escala piloto experimento.

La productividad media de S. platensis BP crecido en el medio 2 en el experimento a escala piloto (100 L) fue aprox. 12 g/m2/d, que no fue significativamente diferente (P <0,05) de la productividad obtenida en un medio modificado de Zarrouk (12,7 g/m2/d)

Su composicin tampoco fue estadsticamente diferente (p <0,05) en las clulas cultivadas en el medio 2 en comparacin con el medio modificado de Zarrouk. La composicin de las clulas de S. platensis BP crecido en el medio 2 fue como sigue (% peso seco): protena (57,9%), total de cidos grasos (4,18%), cido linoleico (0,7%), cido -linolnico (1,12%), y ficocianina (19,5%)

Los resultados de este estudio indican que S. platensis BP podra ser cultivadas en 20% del efluente UASB suplementado con 4,5 g/L de bicarbonato de sodio y 0,2 g/L de urea. El clculo del costo de la qumica indic que la preparacin de 1.000 L de medio modificado Zarrouk costara alrededor de 533 baht (EE.UU. $ 15,21) en comparacin con 120 baht (3,41 dlares EE.UU.) para el medio 2 (1 baht tailandes = 0.032499 U.S. dollars).

Por lo tanto, el 2do medio tiene un alto potencial econmico, ya que la cantidad de bicarbonato de sodio en comparacin con medio modificado de Zarrouk (8 g/L de bicarbonato de sodio) se puede reducir a casi la mitad (4,5 g/L) y su costo es 4,4 veces ms barato que el medio modificado de Zarrouk.

Eliminacin de nutrientes:

La tasa media de eliminacin de la alcalinidad de bicarbonato fue de alrededor de 380 mg/L/d.

Los niveles de fsforo disminuyeron rpidamente dentro de

2 das y su tasa de eliminacin disminuy ligeramente despus de 8 das de cultivo. Al final del experimento (17 das de cultivo), el nivel de fsforo fue de 17 mg/L. Las eficiencias reportadas de eliminacin de nitrgeno y el fsforo variaron dependiendo de la composicin de los medios y las condiciones ambientales.

En cuanto a la observacin de clulas, S. platensis BP cultivadas en el medio 2 pas de verde azulado a verde amarillento despus de ms de 17 das. Esto es probablemente debido a la limitacin de nitrgeno producido en el cultivo. Cuando el cultivo se empobrece de nitrgeno, Spirulina usa ficocianina como reservas de nitrgeno para la sntesis de otras protenas. Adems, la reduccin en la cantidad de amonaco era no slo por la absorcin activa durante el crecimiento de Spirulina, sino tambin por extraccin a la atmsfera. Se confirm que el amonaco se pierde en la atmsfera mediante la comparacin de los niveles en las aguas residuales sin clulas. Los resultados revelaron que la reduccin diaria de los niveles de amonaco en el efluente UASB sin y con S. platensis BP fueron 70% y 100%, respectivamente