Aula Prtica Exames copro-parasitolgicos 1.

. Colheita das fezes Seguem abaixo algumas recomendaes importantes para a colheita de fezes destinadas a exames copro-parasitolgicos: As fezes devem ser, de preferncia, recentes. Recomenda-se que no tenham entrado em contato com o solo devido grande possibilidade de contaminao do material por nematides de vida livre.

1.1. Ruminantes e eqinos Para retirar as fezes diretamente do reto, utiliza-se uma luva de procedimento descartvel ou um saco plstico massageando-se as paredes retais. A luva ou saco plstico so invertidos, amarrados e, aps a retirada do ar, usados como recipientes de transporte. Caso no seja possvel a colheita diretamente do reto, colher imediatamente aps a defecao a poro do material fecal que no tenha entrado em contato com o solo. Amostragem. Deve representar o rebanho quantitativa e qualitativamente. Amostrar diversos animais do plantel, considerando-se sua idade, estado nutricional e possveis diferenas de manejo. Quantidade da amostra: 30 a 50 gramas de fezes. Identificao. Todos os dados sobre o animal (espcie, nome ou no, data, propriedade, etc.) devero ser anotados no recipiente. Estas informaes podero tambm ser descritas em folha separada, anotando-se apenas o nome ou no do animal correspondente no saco plstico com caneta de retroprojetor.

1.2. Ces e gatos As fezes devero de preferncia ser coletadas a partir de um superfcie limpa (jornal, azulejo) sobre a qual o animal tenha defecado. Alternativamente, colher as fezes da poro mais superior que no tenha entrado em contato com o solo. Utilizar saco plstico ou coletor universal. Quantidade: 5 a 10 gramas Identificao: colocar etiqueta no coletor e anotar a espcie, raa, nome, sexo e idade do animal. 2. Conservao das fezes 2.1. Conservao a frio

 Armazenar os sacos plsticos com as amostras de fezes num recipiente de isopor com gelo em escamas ou contendo gelo reciclvel, alternando-se o material em camadas. As fezes podero ser conservadas por 24 a 48 horas. Amostras de ces e gatos tambm podem ser conservadas no refrigerador por um perodo mximo de 48 horas. 2.2. Conservao qumica Conservantes qumicos so utilizados quando o tempo decorrente entre a colheita do material e seu envio ao laboratrio for maior que 48 horas, ou quando inexistirem condies de conservao a frio. Alternativas: Para a conservao de ovos e larvas de helmintos pode-se utilizar formol a 10% ou formol-glicerina 5% (na proporo de 1:1). Fezes para a pesquisa de oocistos de coccdias devem ser conservadas em bicromato de potssio a 2% ( na proporo de 1:1) Fezes para a pesquisa de formas trofozotas e cistos de protozorios devem ser conservadas utilizando-se como lquido conservador o MIF ou lquido de Schaudin (na proporo de 1 parte de fezes para 3 partes do conservante). Soluo MIF Thimerosal 1:1000.................................. 200ml gua destilada........................................ 200ml Formol ................................................... 25ml Glicerina ................................................ 5ml 3. Mtodos para diagnstico copro-parasitolgico O processamento de material fecal para exames parasitolgicos visa dois principais objetivos: Clarificar o material a ser examinado para permitir uma fcil diferenciao entre os parasitas e os debris; Concentrar as formas dos parasitas (cistos, oocistos de coccdias, ovos e larvas de helmintos) para aumentar a sensibilidade e reduzir o nmero de campos microscpicos necessrios para o exame. A escolha do mtodo coprolgico a ser utilizado depende, entre outros fatores, da espcie animal, aspecto qualitativo ou quantitativo e principalmente da suspeita clnica. Nas aulas prticas anteriores abordamos os mtodos de exame direto, flutuao em sal (Willis) e contagem de ovos em cmara de MacMaster. Nesta aula sero abordados os seguintes mtodos: Mtodo de concentrao por sedimentao espontnea (mtodo de Hoffmann) Mtodo de Baermann modificado Coprocultura - Tcnica de Roberts e O Sullivan

3.1. Mtodo de concentrao por sedimentao espontnea Mtodo de Hoffmann Objetivo Identificao genrica de ovos e larvas de nematides e trematides gastrintestinais. Princpio A tcnica de sedimentao um teste qualitativo para a deteco de ovos e larvas de helmintos. uma tcnica til para ensaios preliminares visando identificar que grupos de parasitas esto presentes em uma amostra. Apresenta a vantagem de recuperar ovos e larvas das fezes, sobretudo ovos pesados de trematides e de espirurdeos, os quais se sedimentam mesmo quando se emprega a tcnica de flutuao em sal. Por serem pesados, ovos e larvas so sedimentados espontaneamente, lavados e concentrados e em seguida examinados. Material 2 a 3g de fezes Copo de plstico Clice cnico Peneira ou coador Gaze Basto de vidro ou palito de sorvete Pipetas Pasteur com pra de borracha 1 litro de gua

Tcnica 1. Misture no copo plstico uma pequena quantidade de fezes (2 a 3 gramas) com 20 a 30 ml de gua e homogenize bem com um basto de vidro ou palito. 2. Transfira a suspenso para o clice cnico filtrando-a com o auxilio de uma peneira de ch recoberta com gaze. 3. Despreze o material presente no coador em seguida adicione gua no clice cnico onde ocorrer a sedimentao espontnea dos ovos e larvas. 4. Aps 30 minutos recolha o sedimento com uma pipeta Pasteur, coloca-se o lquido entre lmina e lamnula. 5. Observe a lmina ao microscpio com uma objetiva de 10x e, posteriormente, mude para a objetiva de 40X. 6. A inspeo da lmina dever ser feita escolhendo-se um canto e ento movendo-se a lmina para ao canto oposto, em um movimento de ida e volta, procurando sobrepor parcialmente os campos microscpicos. 7. Alternativamente, se o sobrenadante estiver muito sujo, este pode ser desprezado com cuidado, para no perder o sedimento. Em seguida, adiciona-se gua novamente aguardando-se mais 30 minutos. Este processo de lavagem facilita o exame microscpico e pode ser repetido de 30 em 30 minutos ou mais.

3.2. Mtodo de Baermann, modificado Objetivo Deteco e identificao de larvas de nematides nas fezes. Princpio Baseia-se no termotropismo, hidrotropismo e geotropismo das larvas. Material Tcnica 1. Colocar as fezes no centro da gaze e envolver o material, formando um saquinho. 2. Prender o saquinho na parede do tubo cnico com o auxlio do prendedor. 3. Adicionar gua a 45 C pelas paredes do clice, at encobrir completamente o saquinho com as fezes. 4. Deixar, de preferncia, de um dia para o outro (overnight), ou esperar no mnimo 2 a 3 horas. Durante a aula prtica esperaremos de 30 minutos a 1 hora. 5. Coletar o material do sedimento do tubo cnico com uma pipeta Pasteur, colocar entre lmina e lamnula, e examinar ao microscpio com objetiva de 10x. 3.3. Coprocultura Tcnica de Roberts e O Sullivan Objetivo Identificao genrica de nematides gastrintestinais atravs da morfologia das larvas Princpio Incubao de ovos de helmintos presentes nas fezes at sua ecloso e liberao das larvas dos nematides Material 20-30g de fezes serragem de madeira de pinho esterilizada ou vermiculita recipiente de vidro (250-300ml) basto de vidro borrifador placas de Petri pipetas de Pasteur com pra de borracha ou conta-gotas Fezes: 3 - 5g Gaze cortada e dobrada Prendedor Palito de sorvete ou basto de vidro Tubo cnico

tampas com furos ou papel alumnio perfurado ou gaze vidro de relgio

Tcnica: Preparo da coprocultura 1. Em um recipiente de vidro, misturar as fezes com a vermiculita ou serragem, na proporo de cerca de duas partes de vermiculita para uma de fezes. A mistura deve ficar homognea e solta. 2. Borrifar a cultura com gua, se necessrio. 3. Identificar o frasco com a nmero do animal e a data. 4. Cobrir o frasco com gaze, ou papel alumnio perfurado, ou com a prpria tampa do frasco com furos, para entrada de ar. 5. Incubar em estufa, temperatura de 25 a 27 C, durante 7 dias ou deixar no ambiente por 10 dias. 6. Verificar diariamente o grau de umidade da cultura e borrifar gua, se necessrio. Colheita das larvas Transcorrido o perodo de 7 dias na estufa ou 10 dias no meio ambiente, faz-se a colheita das larvas, da seguinte maneira: 1. Encher o frasco de cultivo com gua temperatura de 45 C at a borda. 2. Tampar o frasco com placa de Petri, invertendo-se bruscamente, para evitar que a gua derrame. 3. Colocar gua (tambm a 45 C) at a metade da placa de Petri 4. Aps 12 horas, retirar com pipeta Pasteur o contedo da Placa de Petri, transferindo-o para um vidro de relgio e observar em lupa. 5. Transferir um ou duas gotas do lquido em uma lmina, adicionar lugol para matar e corar as larvas, acrescentar uma lamnula e proceder identificao microscpica das larvas. Identificao das larvas infestantes dos nematdeos gastrintestinais: Elementos que geralmente so levados em considerao para a identificao das larvas: Tamanho da larva Presena ou no de bainha Tipo caudal Espao entre a ponta da cauda da larva e a ponta da cauda da bainha Nmero e tipo de clulas intestinais (difcil visualizao)

Para a tipificao imediata das larvas infestantes devemos inicialmente agrup-las de acordo com o comprimento da cauda e da bainha: Larvas de cauda curta: Trichostrongylus e Ostertagia Larvas de cauda mdia: Bunostomum, Haemonchus e Cooperia Larvas de cauda longa: Oesophagostomum, Nematodirus e Chabertia

Trichostrongylus

Ostertagia

Bunostomum

Haemonchus

Cooperia

Oesophagostomum