EXTRACCIN LQUIDO-LQUIDO DE LA CAFENA.

La extraccin lquido-lquido es una tcnica de laboratorio de uso frecuente para aislar compuestos orgnicos a partir de su fuente natral. Se basa en las propiedades de solubilidad de la sustancia a extraer y del disolvente utilizado. Usualmente la matriz del compuesto de interr es acuosa por lo que estos solventes suelen ser apolares. La cafena es un compuesto famoso, aislado por primera vez de los granos del caf, es un estimulante de amplio uso en la industria de las bebidas. CAFENA Componente delos frutos de la planta de caf, el t, el mate y las bayas de guaran, la nuez de cola y el chocolate participando en el sabor amargo de estos productos. En total se sabe que la cafena es un componente qumico de alrededor de 60 plantas que lo emplean como pesticida natural, que paraliza e incluso mata cierta clase de insectos. Es un producto del metabolismo secundario (metabolito secundario9 por lo que se considera que no es esencial para la planta y es almacenada en vacuolas pues es potencialmente txico para las clulas de las plantas y adictivo para los seres humanos. Los restos hallados de las primeras civilizaciones agrcolas (alrededor de 10 000 a.C.) demuestran que el caf y una de las descripciones ms tempranas de su uso se encuentra en un libro mdico rabe que data del ao 900 d.C. el botnico sistemtico; Lineus, la nombr, el rbol del Coffea arabica. El descubrimiento de las propiedades del t, a partir de Oriente, se le atribuye al fundador del Zen, Daruma. Aunque los expertos afirman que el uso mdico del t se report muy temprano como en el ao 2737 a.C., en la farmacopea del Shen Nung, un emperador de China, en el diccionario Chino de Kuo Po, el cual apareci en 350 d.C. se menciona su uso medicinal. El uso popular o no mdico del t parece haberse esparcido lentamente. Solo hasta el ao 700 d.C., la planta de t se cultiv ampliamente en China. En 1819 el qumico alemn Friedrich Ferdinand Runge asla por primera vez la cafena del caf. Siempre se ha valorado la cafena: en 1475 la legislacin turca convirti en motivo de divorcio la incapacidad de un marido de ofrecer suficiente cantidad de caf a su esposa. Qumicamente, la cafena es un alcaloide del grupo de las xantinas. Las xantinas son un grupo qumico de bases purnicas que incluyen sustancias endgenas tan importantes como la guanina y la adenina. A este grupo, tambin pertenecen la teofilina del t, la teobromina presente en el chocolate. La cafena tambin se encuentra en el guaran y el mate, por lo cual tambin se le ha llamado guaranina y matena respetivamente, siendo qumicamente idnticos.

AISLAMIENTO DE LA CAFENA DEL T. El aislamiento de un compuesto natural consiste en su separacin de los dems constituyentes sin que se altere su estructura qumica. Puesto que el material vegetal es una matriz compleja (con muchos constituyentes), el mtodo de extraccin lquido-lquido es adecuado pues es selectivo para el aislamiento de cafena. Las hojas del t contienen carbohidratos como la celulosa, la cual es un componente estructural de las plantas, pequeas cantidades de glucosa y almidn. Otros componentes de las hojas son protenas y aminocidos, cafena (2-3.5%), taninos (compuestos polifenlicos), pigmentos como la clorofila y saponinas. La cafena es acompaada por una serie compleja de sustancias las cuales, obviamente, deben ser separadas. Los taninos son componentes abundantes en las hojas, los cuales le confieren el sabor astringente y amargor caracterstico. Las saponinas son compuestos espumantes, que se comportan de manera similar al jabn (del latn sapo, que significa jabn) y las plantas lo usan contra depredadores. Los compuestos anteriores suelen extraerse junto con la cafena excepto la celulosa, que permanece en las hojas. A pesar de que la celulosa es un polmero polihidroxilado (con preso molecular por encima de 500 000 g/ mol) no es soluble en agua debido a la fuerte atraccin por enlaces de puente de hidrgeno entre las cadenas polimricas que no permite la solubilizacin en agua. La cafena puede ser separada de los otros componentes del t por extraccin lquido-lquido con un solvente orgnico como el diclorometano por la diferencia de polaridades de los componentes del t. La cafena es un compuesto de polaridad media, soluble en agua y algunos solventes orgnicos. Posee un coeficiente de particin entre diclorometano y agua de 5 (KDiclorometano/agua 5) aproximadamente, lo que indica que la cafena es cinco veces ms soluble en diclorometano que en agua. La glucosa, los aminocidos y las protenas son compuestos polares solubles en agua e insolubles en la mayora de compuestos orgnicos. Estos, permanecen en la capa acuosa despus de la extraccin con el solvente orgnico. La clorofila y los compuestos formados por su oxidacin, son solubles en agua y en solventes orgnicos, por lo tanto, se repartirn en ambas capas. Sin embargo, debido a que su presencia es muy pequea en la fase orgnica, pueden ser eliminados

en la etapa de recristalizacin o sublimacin de la cafena. Los taninos son una familia de compuestos orgnicos de origen natural con masa molecular de 600 a 3000 Da. El tipo de taninos pueden ser del tipo que se hidrolizan con agua y de los que no lo hacen. Los que estn presentes en el t son del tipo hidrolizables. Estos consisten de una molcula de glucosa unida a uno o ms grupos galolo, los cuales pueden reaccionar con agua (hidrlisis, del griego hydor, agua; lysis, romper) para formar el cido correspondiente. Fig 9.4

Los enlaces entre glucosa y galolo son tipo ster (-O-CO-). Estos enlaces se rompen fcilmente con la adicin de carbonato de calcio o sodio por hidrlisis. El agua rompe estos enlaces de ster, fraccionando la macromolcula de tanino en unidades de azcar y cido glico. Resultado de esto, son molculas de glucosa y cido glico o sus sales de calcio, muy solubles en la fase acuosa. Fig 9.5 Debido a esta afinidad por la fase acuosa, al adicionar el solvente orgnico, la glucosa y las sales del cido glico permanecern en la fase acuosa. Adems de los taninos, las clorofilas oxidadas y algunos flavonoides contribuyen a la coloracin, caf oscura que se observa en la bebida.

MATERIAL Y EQUIPOS Vaso de precipitados de 250 mL Estufa Agitador de vidrio

Esptula Erlenmeyer de 50 y 250 mL Pera de succin Probeta de 100 mL Aro Embudo de separacin Vidrio de reloj Pipeta graduada de 10 mL Caja de Petri Balanza REACTIVOS Diclorometano Papel filtro Carbonato de sodio, Na2CO3 PROCEDMIENTO En este procedimiento se extrae la cafena del t negro, una de las plantas que contiene mayor proporcin de cafena, adems, puede conseguirse en bolsas que permite la filtracin del material insoluble. Cuando se usa otra fuente como el caf tostado, es necesaria la modificacin de algunos pasos en la extraccin. Aislamiento de cafena de las hojas del t. Abra una bolsa de t y pese su contenido. Esta informacin ser usada para calcular el porcentaje de rendimiento de la extraccin. Deseche las hojas en el reservorio adecuado. Coloque 5 bolsas de t, 5 g de carbonato da sodio (Na2CO3) o de calcio, y 100 mL de agua en un vaso de precipitados de 250 mL. Lleve la mezcla a ebullicin suave sobre una plancha de calentamiento. Use un agitador de vidrio para mezclar y prevenir la proyeccin del lquido (tenga cuidado de no romper las bolsas). Hierva la mezcla por 20 minutos. Remueva las bolsas de t, suavemente presinelas contara la pared del vaso de precipitados empleando el agitador de vidrio. Deje que los slidos se vayan al fondo y filtre en bomba de vaco con papel filtro. Permita que el filtrado se enfre colocndolo en un bao de hielo. Cuando el filtrado ha alcanzado la temperatura ambiente, extraiga la solucin con una porcin de 5mL de diclorometano usando un embudo de separacin de 250 mL. En este experimento, la presencia de saponinas1 en el extracto favorece la formacin de emulsiones indeseables pues hace dificultosa la separacin de las capas. Para minimizar este problema no agite el embudo de separacin vigorosamente, en vez de esto, solo invierta y rote el embudo de separacin suavemente por un periodo de 5 minutos, tal como se muestra en la fig.2 Durante este proceso, ventile el embudo frecuentemente abriendo lentamente la llave de paso para eliminar el aumento en la presin. Separe ambas capas como sigue: coloque el embudo de separacin sobre un aro, remueva el tapn y abra cuidadosamente la llave de paso, recogiendo la capa inferior (la fase orgnica) en un
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Las saponinas son compuestos orgnicos que forman espuma de manera similar al jabn. Al poseer

esta caracterstica, facilita la formacin de emulsiones estables, ver fig. 4 para un ejemplo.

frasco Erlenmeyer de 50 mL. Repita la extraccin sobre la fase acuosa remanente con otra porcin 5 mL de diclorometano. Recoja la fase orgnica en el frasco que contiene el primer extracto de diclorometano. A continuacin, realice una tercera extraccin con 5 mL de diclorometano y renalo con los dos extractos anteriores. Con esto se consigue alrededor de 15 mL de extracto. Algo de la emulsin o gotas de fase acuosa puede estar presente en la fase orgnica. La capa orgnica es entonces tratada con un agente secante con el doble propsito de secar y romper la emulsin. Adicione alrededor de 1 g de sulfato de sodio anhidro2 a la fase orgnica. Cubra el frasco con un tapn; djelo alrededor de 10 minutos ocasionalmente agitando. Asegrese de que la fase orgnica sea transparente y sin gotas de agua. Filtre la fase orgnica usando una pequea mota de algodn en el cuello de un embudo de gravedad. Con el agitador de vidrio aplique suavemente presin para asegurar el algodn al cuello del embudo mientras se hace la filtracin. Lave el sulfato de magnesio atrapado por el algodn con 2 mL de diclorometano. Si el sulfato de sodio pasa a travs de la cua de algodn, filtre nuevamente la solucin usando una pieza de algodn ms grande. Remueva el solvente usando un rotavapor o evaporando hasta sequedad. Pese el producto al que se le denominar cafena cruda. Calcule el porcentaje de rendimiento basado en la cantidad originalmente usada. La cafena puede aislarse del caf tostado y molido. Para ello se debe modificar uno de los pasos iniciales. Esto consiste en hacer una filtracin para retirar el residuo slido remanente despus de hervir por 20 min. Los pasos siguientes son iguales. Tambin puede usarse como solvente de extraccin el cloroformo. El cloroformo debe manejarse con ms cuidado debido a que interacta con ciertos receptores del sistema nervioso, pues se caracteriza por ser depresor del SNC (Sistema Nervioso Central) Purificacin por recristalizacin La cafena cruda obtenida por la evaporacin del diclorometano puede ser purificada poa recristalizacin de una mezcla de solventes. Tome toda la cantidad posible de cafena del fondo del baln y colquela sobre una hoja de papel previamente pesada; determinando la cantidad de cafena cruda pesada. Transfiera la cafena cruda a un tubo de ensayo grande; disuelva el slido adicionando acetona calentada en un bao de agua (alrededor de 5-6 mL deberan ser necesarios para disolver la cafena). Agite constantemente con una varilla de vidrio. Adicione ter de petrleo caliente gota a gota hasta que la nubosidad formada sea persistente. Adicione algunas gotas de acetona, lo suficiente para hacer desaparecer la nubosidad. Enfre la solucin y recolecte los cristales por filtracin al vaco. Permita que el slido se seque en el filtro con la bomba encendida. Pese la cafena purificada y determine el rendimiento de recristalizacin. Purificacin por sublimacin La cafena cruda reunida en una caja de Petri es tapada. Sobre la tapa de la caja de Petri se coloca un vaso de precipitados con agua fra que proporciona una superficie para cristalizar la cafena. La caja se calienta hasta la generacin de vapores (cafena sublimada) dentro de la caja de Petri, suspenda el calentamiento y verifique que se hayan formado los cristales de cafena en la tapa.
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Esta cantidad es orientativa, pues la cantidad de sulfato de sodio anhidro adicionada depende de la

cantidad de agua presente. Se recomienda que su adicin sea paulatina con agitacin suave hasta que la solucin sea transparente.

Pese y calcule la recuperacin.