Cromosoma material hereditario organizado Procariontes.- Simples molculas de cidos nucleicos Eucariontes.

- Asociaciones de cidos nucleicos y protenas

La funcin esencial de los cromosomas es conservar, transmitir y expresar la informacin gentica que contienen. En sta informacin quedan comprendidos elementos genticos adicionales, tales como los plsmidos y el ADN de orgnulos citoplasmticos como mitocondrias y cloroplastos.
Mapa del plsmido R conjugativo: el segmento determinante de resistencia contiene genes que confieren resistencia (Sm, Su, Hg) ubicados sobre transposones (Tn) compuestos, que mantienen la capacidad de transponerse en conjunto o aisladamente.

Para Rieger et al (1991), las funciones principales del cromosoma son: transmitir la informacin gentica de clula a clula, conservar la informacin en las generaciones. Liberar de forma ordenada la informacin para controlar las funciones celulares y el desarrollo del organismo (expresar la informacin).

El trmino cromosoma cuerpo que se tie, fu introducido por Waldeyer (1888).

Los componentes mayoritarios del cromosoma son ADN (ADN polimerasa, las transcriptasas etc), histonas ARN y protenas no histnicas. Como componentes minoritarios se encuentran los lpidos, polisacridos y algunos iones (Ca ++, Mg ++ y otros como el Fe++ )

Los cuatro componentes qumicos mayoritarios del cromosoma se encuentran en las siguientes proporciones de peso (Stein et al, 1975): ADN =1 (valores tomados como unidad de comparacin), proteinas = 1,5-2,5 (histonas=1, no histonas= 0.5-1.5), ARN= 0.05

La desoxiribonucleoprotena (DNP) se puede separar del resto de los componentes cromosmicos por tratamiento con cloruro sdico 1M,

Constituye del 60 al 90 % de la masa total del cromosoma, destacando la igualdad en peso del ADN y las histonas. El anlisis de la estructura qumica del cromosoma eucaritico se puede realizar tanto de la cromatina como de la organizacin del ADN del genoma.

Inicialmente el trmino cromatina fue definido como la sustancia que constituye el ncleo interfsico con ciertas propiedades de tincin (Flemming 1882). Esta definicin al igual que la inicial de cromosma es puramente citolgica. Desde el punto de vista gentico tanto la cromatina como el cromosoma, son material gentico organizado.

El concepto de cromatina se utiliza tambin para hacer referencia a la organizacin molecular del material hereditario. Para algunos autores la cromatina es el conjunto complejo de ADN y las histonas presentes en el ncleo interfsico (Riger et al, 1976). Otros autores consideran que en la estructura de la cromatina tambin intervienen las protenas no histnicas, incluso, algunos autores piensan que el ARN tambin es importante en la estructura de la cromatina.

Los principales componentes que se obtienen cuando se asla la cromatina de los ncleos interfsicos son: el ADN, las histonas, las protenas no histnicas y el ARN. La cantidad de protenas no histnicas pueden variar en los tejidos, en el mismo individuo y dentro del mismo tejido a lo largo del desarrollo.

Para algunos autores el ARN y las protenas no histnicas no son constituyentes verdaderos de la estructura cromosmica, considerando que por ejemplo el ARN detectado es un ARN naciente producto de la trascripcin y las protenas no histnicas tienen una misin enzimtica o reguladora, pero no estructural. Hay alguna evidencia a favor de un posible papel estructural del ARN y las protenas no histnicas Al considerar la estructura de la cromatina nos vamos a referir al nucleosoma.

Son protenas bsicas ricas en residuos de Lisina y Arginina, que muestran un elevado concervadorismo evolutivo y que interaccionan con el ADN, formando una subunidad que se repite a lo largo del cromosma denominada NUCLEOSOMA.

Los principales tipos de histonas que se han aislado en los ncleos interfsicos en diferentes especies eucariticas son H1, H2A, H2B, H3 y H4.

Histonas y estructura nucleosomal de la cromatina Las histonas que forman parte de la cromatina son de varios tipos cuyas caractersticas se indican en el siguiente cuadro:

Histona Numero de residuos

Pm (dalton) 21,000 13,960

Contenido Lys (mol%)

En Arg (mol% 1,4 9,3

Lys/Ar g 19,78 1,17

Tipode modificacin

Velocidaddecambio evolutivo(Numero cambio/100)aa/100 millonesaos.

H1 H2A

213 129

27,7 10,9

Fosfortilacin Fosfortilacin Acetilacin Acetilacin Fosfortilacin Acetil.Metil. Fosfortilacin Acetil.Metil. Fosfortilacin

4 1

H2B

125

13,774

15,2

6,1

2,49

H3

135

15,273

9,6

13,3

0,72

0,1

H4

102

11,230

10,8

13,7

0,79

0,06

En las cinco fracciones histnicas mencionadas existen otras especficos de tejidos que pueden mostrar algunas caractersticas diferentes como la H5 , muy rica en Lisina (25 moles %)que solo se encuentra en eritrocitos nucleados de vertebrados no mamferos o las histonas presentes en el esperma

Un de sus caracteristicas mas destacadas es su conservacionismo evolutivo, especialmente H3 y H4. Ejemplo: Histonas H4 de guisante y timo de ternera difieren en dos aminocidos .

Los genes ADNh que codifican las histonas estn agrupadas en nichos (clusters) que se repiten por decenas (Xenopus laevis) o centenas Psammechinus milianis erizo de mar

Se observ que la fibra de cromatina no era lisa, sino que presentaba a intervalos regulares unos corpsculos globulares como si fueran las cuentas de un collar (Olins y Olins, 1974). El anlisis molecular demostr que, en efecto la cromatina est conformada por subunidades que se repiten de forma regular los nucleosomas constituidos por unas 200 pb de ADN y dos molculas de cada una de las histonas denominadas H2A, H2B. H3 y H4 y una molcula de H1 (Kornberg, 1974).

Posteriormente se pudo ver que el nucleosoma est formado por dos componentes: la mdula o core y el ligador (Linker). La mdula est formada por 146 pb de ADN que envuelve a un octmero de histonas ( H2A, H2B, H3, H4 ), en forma de tronco oblcuo de cilindro (platisoma) de uno 11 nm de dimetro y 4,5 5,5 de generatriz. El ligador tiene una longitud variable de ADN (desde unas 19 pb hasta poco mas de 100 pb ) en interaccin con otra fraccin histnica: la H1. El grupo dirigido por Aaron Klug realiz el anlisis ultra estructural de los nucleosomas mediante microscopa electrnica cristalogrfica (Finch y col., 1977 ). Klug recibi el Premio Nobel en 1982

La estructura de los nucleosomas no es rgida permite adaptarse a estructuras de orden superior de la cromatina como son los solenoides de 20 a 30 nm (Finch y Klug, 1976 ) , que constituyen la fibra cromosmica de los ncleos interfsicos y los supersolenoides 400-600 nm que corresponden a las cromatidios de los cromosomas metafsicos. Como resultado de tales enrollamientos se produce una compactacin del ADN a tres niveles: en el nucleosoma (relacin de compactacin 7:1), en la cromatina interfsica (nivel de compactacin de 6:1con una relacin final de compactacin 42:1) y en el cromatidio metafsico (relacin de compactacin 7000:1 Esta compactacin mxima facilitar la segregacin de la informacin durante la mitosis sin problema de tipo mecnico.

Al hacer referencia a la cromatina hay que desechar un concepto estructural esttico sino que, atendiendo al binomio biolgico estructura-funcin , es obligado tener siempre presente el aspecto dinmico, es decir, como armonizar los datos estructurales antes descritos con los fenmenos genticos de replicacin, transcripcin recombinacin y reparacin
10 nm

30nm
30nm

4 5 6

3 30 nm 1
10nm

400 nm

Frente a un modelo predominante de la cromatina que supone que la clula de nucleosomas se pliega segn una fibra helicoidal simtrica se ha propuesto tambin un modelo de organizacin simtrica basada en la heterogeneidad de las longitudes de los ligandos de ADN de la partcula nucleosomal.

En relacin con las aplicaciones funcionales de los nucleosomas como unidad bsica de la cromatina, cabria sealar las siguientes caractersticas: Heterogeneidad de los nucleosomas.Las modificaciones postsinpticas de las histonas (articulacin, metilacin, fosforilacin) pueden introducir cierta heterogeneidad en los nucleosomas, as como la variacin existente dentro de algunas de las fracciones histnicas. Deslizamiento de los nucleosomas.- La posibilidad de desplazamiento de los nucleosomas sobre el ADN para explicar tanto la dinmica de la replicacin como de la trascripcin.

-Cambio conformacional del nucleosoma.- A baja fuerza inica,la estructura completa del nucleosoma o del platisoma puede convertirse en dos seminucleosomas o en otras estructuras extendidas: los nucleosomas abiertos. En ambos casos el cambio conformacional es reversible En cuanto al aspecto funcional de la replicacin cabe indicar que existen evidencias de que en los replicones el ADN nuevo adquiere rpidamente histonas y morfologa nucleosomal Seale ( 1977) incluye tres aspectos siguientes:1) la sntesis de las histonas coordinada con la sintesis del ADN. 2) los mecanismos por lo que las histonas de la nueva sntesis seleccionan el lugar de interaccin con el ADN para dar lugar a nuevos nucleosomas y 3) el mecanismo de distribucin de las histonas preexistentes a los cromatidios tras la reproduccin cromatdica.

Tericamente las protenas cromosmicas no histnicas (PCNH) son diferentes de las histonas, y se aslan como componentes de la cromatina o de ncleos lavados en solucin salina. Desde el punto de vista estructural de la fibra cromatnica se ha detectado la presencia de un tipo no histnico que se denominan genticamente protenas HMG (grupos de alta movilidad electrofortica) (Johns, 1988)

Protenas cromosmicas, extradas de la cromatina en NaCl 0,35M, de alta movilidad electrofortica. Alto contenido en Aminocidos bsicos (25% o mas), alto contenido en aminocidos cidos (20-30 %). Destacan por su importancia HMG-1 (P.m 29,000 daltons, HMG-2 (Pm= 29,000) HMG-14 (Pm= 10700 y HMG-17 (Pm= 9200, encontradas en todas las especies de mamiferos, aves y peces estudiados. (Mayer, 1882).

El papel de las HMG-1 y HMG-2 es muy diferente al de las HMG-14 y HMG-17. Hay una molcula de HMG-1 HMG-2 para cada 15 nucleosomas y una molcula de HMG-14 o HMG-17,`por cada 10. Las protenas HMG-1 y HMG-2 se encuentran tanto en el ncleo como en el citoplasma y su asociacin con las protenas no est bien definida. Las protenas HMG-14 y HMG-17, solo se detectan en el ncleo y asociadas claramente a los nucleosomas.

Las protenas HMG-1 y HMG-2 estn implicados en el proceso de replicacin, muestran afinidad por hlices sencillas de ADN y produce un efecto desenrollante sobre el ADN bicatenario. Las HMG-14 y HMG-17 estn implicadas en la regulacin de la transcripcin, se manifiesta en la sensibilidad a la ADNasa I a la cromatina de los genes transcripcionalmente activos. En general el dominio HMG es un motivo de unin al ADN que interacciona con el surco menor de la doble hlice, se une a estructuras irregulares de ADN y tiene capacidad de modular la estructura del ADN, doblndola para formar complejos ncleo protenicos de orden superior.

Se ha demostrado que protenas muy diversas pueden presentar dominios HMG, como sucede la modificacin por el gen (SRY) responsable de la diferenciacin testicular en el hombre (Sinclair et al, 1990). En relacin a la existencia de un posible armazn proteico no histnico, hay que indicar la presencia de una estructura axial o mdula (core) constituyendo el esqueleto de cada cromatidio. La presencia del esqueleto (core) cromatdico puede observarse modificando las condiciones de fijacin e incluso usando contraste de fase.

Puede jugar un papel en el plegamiento de orden superior de la fibra ncleoproteica en los cromosomas interfsicos tanto humanos (Cook y Brazell, 1975) como en Drosophila melanogaster. El hecho de que la ARNasa no afecta la estabilidad del armazn descrito por Laemnli y Colt puede ser debido, simplemente a que el ARN estructural este protegido, de la accin enzimtica por las propias protenas.

El valor C- cantidad de ADN por genoma haploide en estado de un cromatidio de una clula eucariota, normalmente expresado en picogramosresulta ser de magnitud mayor que el que podra producirse a partir del nmero de genes que codifican para protenas. Por ejemplo.- Se puede estimar que el genoma haploide de la especie humana contara con 50,000 a 100,000 genes que codifican para protenas. EL proyecto (HUGO).

Suponiendo un tamao medio de las protenas de 500 aminocidos y suponiendo que el genoma haploide contiene 2,8 pg de ADN, ello quiere decir que solo de un 2.5 a un 5% del genoma humano codifica para protenas. Al examinar el contenido en ADN de muy diversos organismos, se ha llegado a comprobar que no hay correlacin entre la complejidad evolutiva ( gentica) y dicho contenido, que es lo que ha venido en llamar la paradoja del valor C. Es interesante sealar que el tamao mnimo del genoma correspondiente a los diferentes taxones parece estar relacionado con la complejidad evolutiva.

Quizs exista una informacin gentica mnima desde el punto de vista cualitativo pero expresable en cantidad de ADN necesario para que los organismos de un cierto taxon se desarrollen como tales y a partir de ella pudiera haber determinados procesos moleculares que produjeran la cantidad de ADN (mecanismos de duplicacin) sin que se produzcan cambios sustanciales en el patrn de desarrollo. Ejemplo.- Los anfibios oscilan entre 1 y 100 pg de ADN/ genoma, mientras que los mamferos tienen un rango de variacin mucho menos (+-36pg).

En el contexto en que nos encontramos, podemos referirnos a la organizacin del ADN del genoma eucaritico en trminos de los distintos tipos de secuencia de nucletidos que contienen secuencias nicas, secuencias repetidas, secuencias moderadamente repetidas y secuencias altamente repetidas; las tres ultimas son consecuencia del fenmeno reiterativo o no de la replicacin.

 Secuenciaogenesdecopianica.-Aquellosque codificanparapolipptidos(esdecirgenes estructurales)ycuyoslocinoestnrepetidosenel genomahaploide. Secuenciasrepetidas.-correspondenaduplicaciones enlociindividualesseguidadeunaevolucin divergentehaciafuncionesdistintas(genesHbpara hemoglobina;Pgifosfoglucosaisomerasadelospeces seos;losgenesdelatripsinayquimiotripsina). Secuenciasmoderadamenterepetitivas.-Genesque porduplicacindeloslociancestrales,existenenvarias copiasencadagenomasperoconservndose esencialmenteidnticasentresi,tantoenlassecuencias deADNcomoensufuncin.

 Secuencias altamente repetidas.Son secuencias cortas de ADN repetido del orden de 103 106 veces en el genoma haploide. En este grupo cabria distinguir los medianamente repetidos (103 105 veces ) disperso por todo el genoma entre secuencias de copia nica y las altamente repetidas.

El ADN- la cromatina. Definida por Fleming (1882) como la sustancia que constituye el ncleo interfsico y que muestra ciertas propiedades de tincin . El ADN patrn, mayoritario en el ncleo constituye la eucromatina) y aquel que muestra distinto comportamiento con relacin a l se denomina heterocromatina (Heitz 1928, 1929). La condicin heterocromtica de una regin cromosmica se manifiesta por la heteropicnosis positiva o negativa, que se refiere a la tincin mayor o menor.

 Genticas.- Capacidad de mutacin mayor en la eucromatina debido, sin duda a la no expresin de los genes situados en zonas heterocromtica. La influencia de la vecindad de la heterocromatina sobre la estabilidad de la expresin gnica. Citolgicas.-La alociclia que se manifiesta por la heteropicnosis. Una misma regin heterocromtica puede aparecer unas veces como heteropicntica positiva y otra como negativa dependiendo del estado celular. En este sentido es muy tpico el comportamiento de los cromosomas sexuales de los insectos.-La heterocromatina puede ser constitutva y facultativa.

Qumico.-En algunos casos la heterocromatina est relacionada con la presencia de secuencias repetidas. Ejemplo.-Cuando se asla el ADN nuclear y se centrifuga en un gradiente de densidad es posible separar dos partes, una que aparece en proporciones mayoritarias que es el ADN principal y otra minoritaria de distinta densidad llamada ADN satlite, En los roedores, el ADN satlite est constituido por ADN altamente repetitivo. El ADN satlite del ratn es mas ligero que el ADN principal. constantes en el cromosoma.

La asociacin del ADN satlite con la heterocromatina constitutiva sera explicable teniendo en cuenta su mayor importancia como ADN estructural que como transcripcional. Las diferencias inter especficas de los ADN satlites podra atribuirse al resultado de la seleccin natural de cortos segmentos poli nucleotdicos duplicados no transcripcionales pero si utilizados en misiones estructurales. La utilizacin del trmino heterocromatina se mezcla a veces sin distinguir el concepto citolgico puramente descriptivo con los conceptos gentico y bioqumicos.